shRNA干扰下调膜联蛋白A5基因表达逆转乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR耐药性的研究

发布时间：2023-04-14 23:36

　　背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重危害女性健康。发病率占全身各种恶性肿瘤的7%¹0%,死亡率约占确诊率的34.17%。早期诊断和有效治疗可降低乳腺癌的死亡率。药物化疗在乳腺癌的治疗中起着重要作用。然而肿瘤细胞耐药性的产生常常导致肿瘤化疗失败。肿瘤细胞对化疗药物的耐药可分为内在性和获得性两类。内在性耐药是指肿瘤细胞固有的对抗癌药物不敏感,而获得性耐药是指肿瘤细胞在药物治疗初始时对化疗药物敏感,但经过几个周期的药物治疗后,逐渐产生药物疗效下降,对药物越来越耐受。根据耐药表型的不同,细胞耐药可分为原药耐药(primary drug resistance,PDR)和多药耐药(multidrug resistance,MDR)。PDR是指仅对诱导药物产生耐药。而MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药的同时,对其他结构不同和作用机制不同的抗肿瘤药物也产生交叉耐药。MDR是肿瘤化疗失败的主要原因,也是肿瘤化疗亟待解决的问题。目前,MDR的机制主要分为外排(Pump)和非外排(Non-pump)耐药两个方面。药物外排的产生主要是因为ABC转运蛋白家族成员蛋白表达异常...

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料和方法
    1.实验材料
        1.1细胞株
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂
        1.4 主要试剂配制
    2.实验方法
        2.1 细胞复苏、培养、传代、冻存
        2.2 MTT法检测MCF-7 和MCF-7/ADR细胞的药物敏感性
        2.3 Western-blot方法检测MCF-7 和MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5蛋白水平的表达
        2.4 MCF-7 和MCF-7/ADR细胞RNA提取和qRT-PCR
        2.5 流式细胞仪检测细胞表面P-gp蛋白的表达
        2.6 荧光共聚焦显微镜分别检测细胞内阿霉素的红色荧光强度和罗丹明123的绿色荧光强度
        2.7 293T细胞的转染、病毒收获与病毒滴度测定
        2.8 嘌呤霉素（Puromycin）最优浓度筛选
        2.9 慢病毒感染细胞
        2.10 Western-blot方法检测PARP蛋白及其水解片段CleavedPARP的蛋白表达水平
        2.11 统计学分析
结果
    1.人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达高于敏感株MCF-7 细胞
    2.人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR对阿霉素耐药，顺铂、多西他赛的敏感性低于敏感株MCF-7
    3. 膜联蛋白A5敲低序列的构建及下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5基因的表达
    4.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以增加其药物敏感性
    5.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以增加细胞内阿霉素的荧光强度
    6.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达减弱乳腺癌耐药细胞对药物的外排能力
    7.下调MCF-7/ADR细胞中膜联蛋白A5的表达可以促进细胞凋.28（四）讨论
讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3790865