G 0 S 2 在食管癌组织中的表达变化及其对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

发布时间：2023-04-16 07:44

　　背景:食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一,我国是食管癌的高发地区,发病率和死亡率均居世界首位,且有着不断上升的趋势。食管癌的发生涉及到原癌基因的激活、抑癌基因的失活等改变,其中也伴随着表观遗传学的变化,表观遗传学的异常改变可导致抑癌基因的失活,其中DNA甲基化是最常见的表观遗传学改变之一。G₀S₂基因是近年来发现的具有抑制癌症发生、发展作用的基因,其在正常组织、细胞中普遍表达,而在癌组织和癌细胞中表达水平显著降低。G₀S₂基因在食管癌中的作用需作进一步的验证和探索。目的:观察G₀S₂基因在食管癌组织和食管癌旁组织中的表达差异并检测其甲基化的情况以及探讨其对食管癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:(1)收集2016年3月²017年4月在十堰市人民医院手术切除的45例食管癌组织及相应的食管癌旁组织(选取距癌组织边缘>5 cm的食管组织),所有组织均通过伦理委员会审核。对收集到的组织样本进行RNA的提取,并测定所提取样本RNA的浓度和纯度。采用...

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略语表
一、引言
二、实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验样本
        2.1.2 主要药品与试剂
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 组织总RNA的提取
        2.2.2 组织RNA逆转录主要步骤
        2.2.3 组织RNA的qRT-PCR扩增和表达检测
        2.2.4 食管癌组织DNA的提取
        2.2.5 DNA甲基化修饰试剂盒处理组织DNA
        2.2.6 亚硫酸氢盐法处理组织基因组DNA
        2.2.7 DNA产物纯化实验
        2.2.8 甲基化特异性PCR
        2.2.9 TBE电泳缓冲液的配制
        2.2.10 核酸电泳实验
        2.2.11 食管癌KYSE-70细胞的复苏与冻存
        2.2.12 体外培养食管癌KYSE-70细胞以及细胞的处理
        2.2.13 食管癌KYSE-70细胞RNA的提取
        2.2.14 食管癌KYSE-70细胞RNA的逆转录和qRT-PCR扩增
        2.2.15 CCK8法检测细胞的增殖活性
        2.2.16 Annexin V/FITC法细胞凋亡检测
        2.2.17 统计学方法
三、实验结果
    3.1 G₀S₂基因在食管癌组织和食管癌旁组织中的表达变化
    3.2 G₀S₂基因在食管癌组织和食管癌旁组织中甲基化检测
    3.3 腺病毒转染后的验证
    3.4 甲基化抑制剂处理后癌细胞G₀S₂mRNA表达量变化
    3.5 G₀S₂对食管癌KYSE-70细胞增殖的作用
    3.6 5-氮杂-2-脱氧胞苷对食管癌KYSE-70细胞增殖的作用
    3.7 G₀S₂对食管癌KYSE-70细胞凋亡的作用
    3.8 5-氮杂-2-脱氧胞苷对食管癌KYSE-70细胞凋亡的影响
四、讨论
五、小结
参考文献
六、文献综述
    参考文献
七、论文发表情况
八、致谢词



本文编号：3791150