光热可控的烷基自由基发生器用于肿瘤自由基增强治疗研究

发布时间：2023-05-08 02:56

　　近年来,恶性肿瘤的发病率和死亡率日益增长,成为威胁人类健康的重要原因之一。以自由基为基础的肿瘤治疗已广泛应用于临床,自由基主要包括过氧化物、超氧化物、羟基自由基和单线态氧等,可对脂质、蛋白质和DNA造成损伤,引起氧化应激,具有强细胞毒性,进而诱导细胞凋亡。常用的自由基治疗有放射治疗(RT)和光动力治疗(PDT)等。其中光动力治疗(PDT)因其治疗的非侵入性、高选择性、低毒副作用等特点被临床广泛用于多种肿瘤的治疗。然而肿瘤乏氧环境极大降低了 PDT氧依赖的自由基生成,并且肿瘤细胞高抗氧化的内环境如过表达的谷胱甘肽(GSH),也进一步削弱了自由基治疗的效率。然而对于PDT而言,目前大部分光敏剂光毒性大,激光穿透能力差等均限制了其临床应用。因此构建一个不依赖氧气同时可打破肿瘤细胞还原屏障的治疗体系是目前肿瘤高效自由基治疗的需求。基于上述分析,本课题构建了一种兼具乏氧环境高效产生及下调胞内还原微环境的时空可控的自由基治疗体系,该体系主要具备以下特点:(1)利用不依赖氧气的烷基自由基的高效产生治疗肿瘤,2,2’-氮杂双(2-咪唑啉)二盐酸盐(2,2’-azobis[2-(2-imidazolin...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
第一章 前言
第二章 CuS/AIPH@BSA的制备及表征
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
    2 实验内容
        2.1 AIPH化学性质的考察
            2.1.1 烷基自由基测定方法
                2.1.1.1 测定原理
                2.1.1.2 实验方法
            2.1.2 不同温度下AIPH产生自由基能力考察
            2.1.3 不同氧含量下AIPH产生自由基能力考察
        2.2 AIPH含量检测方法的建立
            2.2.1 AIPH检测波长的确定
            2.2.2 AIPH标准曲线的建立
            2.2.3 精密度考察
            2.2.4 回收率考察
        2.3 CuS/AIPH@BSA的制备
            2.3.1 CuS纳米载体的制备
            2.3.2 CuS/AIPH@BSA的制备
        2.4 最佳投料比的考察及包封率的测定
        2.5 CuS/AIPH@BSA各阶段产物的表征
            2.5.1 紫外可见分光光度计波长扫描
            2.5.2 透射电子显微镜
            2.5.3 X射线衍射
            2.5.4 X射线光电子能谱
            2.5.5 粒径分布及Zeta电位
        2.6 CuS/AIPH@BSA自由基发生器性质考察
            2.6.1 光热转换效率的考察
            2.6.2 CuS/AIPH@BSA产生自由基能力考察
            2.6.3 电子自旋共振实验(ESR)
            2.6.4 NIR照射下CuS释放铜离子考察
            2.6.5 CuS/AIPH@BSA降低GSH水平能力考察
                2.6.5.1 GSH标准曲线的建立
                2.6.5.2 GSH含量测定
        2.7 CuS/AIPH@BSA体外释放
        2.8 稳定性考察
        2.9 统计学分析
    3 实验结果与结论
        3.1 AIPH的化学性质
            3.1.1 不同温度下AIPH产生自由基能力考察
            3.1.2 不同氧含量下AIPH产生自由基能力考察
        3.2 AIPH含量检测方法
            3.2.1 AIPH检测波长的确定
            3.2.2 AIPH标准曲线的建立
            3.2.3 精密度考察
            3.2.4 回收率考察
        3.3 最佳投料比的确定及包封率的测定
        3.4 CuS/AIPH@BSA的表征结果
            3.4.1 紫外可见分光光度计波长扫描
            3.4.2 透射电子显微镜
            3.4.3 X射线衍射
            3.4.4 X射线光电子能谱
            3.4.5 粒径分布及Zeta电位的考察
        3.5 CuS/AIPH@BSA的性质考察
            3.5.1 光热转换效率考察
            3.5.2 CuS/AIPH@BSA产生自由基能力考察
            3.5.3 电子自旋共振实验(ESR)
            3.5.4 NIR照射下CuS释放铜离子实验
            3.5.5 CuS/AIPH@BSA降低GSH水平能力考察
                3.5.5.1 GSH标准曲线的建立
                3.5.5.2 GSH含量测定
        3.6 体外释放
        3.7 稳定性考察
    4 本章小结
第三章 CuS/AIPH@BSA体外抗肿瘤活性的研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 主要试剂的配制
    2 实验内容
        2.1 细胞培养
            2.1.1 实验前的准备
            2.1.2 细胞复苏
            2.1.3 细胞传代
            2.1.4 细胞计数
            2.1.5 细胞冻存
        2.2 细胞摄取考察
            2.2.1 CuS/RB@BSA的制备
            2.2.2 共聚焦显微镜用于定性细胞摄取
            2.2.3 流式细胞仪用于定量细胞摄取
        2.3 细胞内的光热转换考察
        2.4 细胞内GSH含量检测
        2.5 细胞内自由基的测定
            2.5.1 荧光显微镜下细胞内自由基的测定
            2.5.2 流式细胞仪测定细胞内自由基
        2.6 细胞毒性考察
        2.7 细胞凋亡实验
        2.8 Calcein-AM/PI试剂盒检测细胞活力
        2.9 单细胞凝胶电泳实验
        2.10 Western blot
            2.10.1 蛋白样品的提取及制备
            2.10.2 实验步骤
    3 结果与讨论
        3.1 细胞摄取的测定结果
            3.1.1 共聚焦显微镜下细胞摄取的测定结果
            3.1.2 流式细胞仪细胞摄取的测定结果
        3.2 细胞内光热转换考察
        3.3 细胞内GSH含量检测
        3.4 细胞内自由基考察
            3.4.1 荧光显微镜下细胞内自由基的测定结果
            3.4.2 流式细胞仪测定细胞内自由基结果
        3.5 细胞毒性考察
        3.6 细胞凋亡实验结果
        3.7 Calcein-AM/PI试剂盒检测细胞活力结果
        3.8 单细胞凝胶电泳实验结果
        3.9 Western blot实验
    4 本章小结
第四章 CuS/AIPH@BSA体内抗肿瘤活性的研究
    1 仪器与试剂
        1.1 仪器
        1.2 试剂
        1.3 主要试剂的配制
    2 实验内容
        2.1 实验动物
        2.2 荷瘤小鼠模型的建立
        2.3 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠的体内组织分布研究
            2.3.1 CuS/IR783@BSA的制备
            2.3.2 CuS/IR783@BSA在荷瘤小鼠体内的组织分布
        2.4 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠体内的光热成像
        2.5 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠体内自由基的考察
        2.6 CuS/AIPH@BSA体内抗肿瘤活性研究
            2.6.1 肿瘤生长抑制的药效学考察
            2.6.2 H&E染色切片分析
            2.6.3 TUNEL凋亡考察
        2.7 统计学分析
    3 结果与讨论
        3.1 CuS/AIPH@BSA在4T1荷瘤小鼠的体内组织分布
        3.2 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠体内的光热成像
        3.3 CuS/AIPH@BSA在荷瘤小鼠体内自由基的考察
        3.4 CuS/AIPH@BSA体内抗肿瘤活性研究
            3.4.1 荷瘤小鼠相对肿瘤体积变化
            3.4.2 荷瘤小鼠肿瘤组织重量
            3.4.3 荷瘤小鼠肿瘤体重变化
            3.4.4 H&E染色切片分析
            3.4.5 TUNEL凋亡考察
    4 本章小结
第五章 全文总结
参考文献
个人简介
致谢



本文编号：3811844