靶向肿瘤血管的溶瘤腺病毒构建及感染性质分析

发布时间：2023-05-25 02:22

　　溶瘤病毒(Oncolytic viruses,Ovs)疗法是肿瘤生物治疗应用的一个热点,其原理是利用病毒的复制能力,选择性感染和裂解破坏肿瘤细胞,且正常细胞和组织无害,裂解的肿瘤细胞可以释放子代病毒和肿瘤相关抗原,刺激机体产生免疫反应进一步杀伤肿瘤细胞。此外,有研究表明:某些OVs(如溶瘤痘病毒)还能够特异性地感染并破坏肿瘤血管,间接引起未感染的肿瘤细胞凋亡或坏死。肿瘤新生血管(Tumor neo-vasculature)为肿瘤细胞的增殖和转移提供氧气和营养物质,OVs通过靶向感染和破坏肿瘤血管将进一步增强其肿瘤杀伤能力并抑制肿瘤的侵袭转移。溶瘤腺病毒,也被称为条件复制型腺病毒(conditionally replicating adenovirus,CRAd)是目前临床研究应用最多的溶瘤病毒之一。目前在研的溶瘤腺病毒主要是基于人血清5型腺病毒(Ad5)改造而来。Ad5的主要细胞受体是柯萨奇-腺病毒受体(CAR),腺病毒通过其纤维蛋白(fiber)与受体结合,从而使其附着在细胞表面,并通过整合素受体内化。由于肿瘤血管内皮细胞表面CAR低表达或不表达,使得CRAd5缺乏感染肿瘤血管内皮细...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 肿瘤血管简介
    1.2 溶瘤腺病毒简介
        1.2.1 溶瘤病毒定义
        1.2.2 腺病毒简介
        1.2.3 溶瘤腺病毒的基因工程修饰策略
    1.3 溶瘤腺病毒在抗血管生成基因治疗中的应用
    1.4 RGD肽在肿瘤抗血管生成治疗中的应用
    1.5 论文设计
        1.5.1 论文思路
        1.5.2 实验设计
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞、质粒、菌种、动物
        2.1.2 主要材料和试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 受体表达分析
        2.2.2 真核表达载体和腺病毒骨架质粒的构建
        2.2.3 Western-Blot
        2.2.4 腺病毒包装、筛选、扩增、纯化及滴度检测
        2.2.5 Dot-blot
        2.2.6 溶瘤腺病毒感染性质检测
        2.2.7 溶瘤腺病毒抑制肿瘤血管能力检测
        2.2.8 溶瘤腺病毒体内抗肿瘤活性检测
        2.2.9 免疫荧光
        2.2.10 数据统计分析
第3章 实验结果与讨论
    3.1 靶向肿瘤血管的腺病毒载体修饰策略可行性分析
        3.1.1 HUVEC细胞α2-3-SA表达分析
        3.1.2 不同修饰策略的真核表达载体的构建
        3.1.3 不同修饰策略的嵌合Fiber表达的验证
    3.2 靶向肿瘤血管的溶瘤腺病毒的获得
        3.2.1 腺病毒骨架质粒的构建
        3.2.2 靶向肿瘤血管的溶瘤腺病毒的包装、筛选、纯化及鉴定
    3.3 溶瘤腺病毒的感染性质分析
        3.3.1 溶瘤腺病毒的转导能力分析
        3.3.2 溶瘤腺病毒的溶瘤作用分析
        3.3.3 溶瘤腺病毒的感染依赖的受体分析
    3.4 .靶向肿瘤血管的溶瘤腺病毒抑制肿瘤血管能力分析
        3.4.1 溶瘤腺病毒的抑制HUVEC能力分析
        3.4.2 溶瘤腺病毒抑制VEGF作用分析
        3.4.3 VEGF对 CRAd感染能力的影响
    3.5 靶向肿瘤血管的溶瘤腺病毒体内靶向感染能力分析
        3.5.1 溶瘤腺病毒体内靶向感染能力分析
        3.5.2 溶瘤腺病毒体内抗肿瘤活性
结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3822747