LncRNA PIK3CD-AS1在肾癌细胞中的功能和机制初探

发布时间：2023-06-01 04:42

　　第一部分PIK3CD-AS1对肾癌细胞侵袭的影响及相关机制研究目的:研究PIK3CD-AS1对肾癌细胞侵袭能力的影响,探索可能存在的机制,为肾透明细胞癌诊断和预后提供参考。方法:我们首先利用实时定量PCR检测构建的稳定高表达PIK3CD-AS1(简称PIK)的PIK细胞是否仍然高表达PIK;然后以PIK细胞作为实验组,PEGFP细胞作为对照组,进行细胞侵袭实验;根据生信分析结果,提取PIK细胞和PEGFP细胞的总蛋白,选择p53为目的蛋白,利用Western blot检测两种细胞表达p53的情况。结果:实时定量PCR检测结果显示PIK细胞相对于PEGFP细胞仍高表达PIK;PIK细胞侵袭能力明显弱于PEGFP细胞;Western blot检测结果显示PIK细胞表达p53蛋白明显高于PEGFP细胞。结论:PIK3CD-AS1抑制肾癌细胞的侵袭迁移,可能的机制是PIK3CD-AS1促进肾癌细胞表达p53蛋白。第二部分DFFA在PIK3CD-AS1抑制肾癌细胞发生发展调控中发挥的作用研究目的:本课题组之前研究成果是PIK细胞较PEGFP细胞表达DFFA降低,深入研究DFFA在PIK细胞增殖、...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
abstract
引言
    参考文献
实验材料
实验仪器
第一章 PIK3CD-AS1对肾癌细胞侵袭的影响及相关机制研究
    细胞与方法
        1.1 细胞株
        1.2 检测上述PEGFP、PIK细胞中PIK3CD-AS1的表达量
        1.3 PIK3CD-AS1对肾癌细胞侵袭能力的影响
        1.4 Western blot检测PIK3CD-AS1对肾癌细胞发挥作用相关机制
        1.5 统计方法
    实验结果
        1.PEGFP细胞和PIK细胞中PIK3CD-AS1的表达
        2.侵袭实验结果
        3.PIK3CD-AS1靶基因预测和验证
    讨论
    参考文献
第二章 DFFA在PIK3CD-AS1抑制肾癌细胞发生发展调控中发挥的作用研究
    细胞与方法
        1.1 细胞株
        1.2 构建过表达DFFA的769P^PIK+DFFA+细胞和对照组769P^PIK+DFFA-细胞
            1.2.1 大肠杆菌DH5α感受态的制备
            1.2.2 质粒的扩增及提取
            1.2.3 质粒的转染、筛选及鉴定
        1.3 细胞增殖实验
        1.4 细胞侵袭实验
        1.5 细胞凋亡实验
        1.6 蛋白印记实验
        1.7 统计方法
    实验结果
        1.PIK(空)细胞和PIK(DFFA+)细胞中DFFA表达情况
        2.高表达DFFA可促进PIK细胞增殖
        3.高表达DFFA可促进PIK细胞侵袭转移
        4.高表达DFFA可促进PIK细胞的凋亡率
        5.PIK细胞表达p53明显高于PEGFP细胞且表达pAKT明显低于PEGFP细胞,而高表达DFFA抑制PIK细胞表达p53蛋白且促进其表达pAKT蛋白
    讨论
    参考文献
第三章 PIK3CD-AS1调控DFFA表达的机制分析
    细胞与方法
        1.1 细胞株
        1.2 检测PEGFP细胞和PIK细胞中PIK3CD-AS1周围基因表达情况
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 实时定量PCR检测细胞中各个PIK3CD-AS1周围1M基因表达情况
        1.3 统计方法
    实验结果
        1.筛选结果
    讨论
    参考文献
第四章 SLC25A33在PIK3CD-AS1抑制肾癌细胞功能中的作用及机制研究
    细胞与方法
        1.1 细胞株
        1.2 构建敲低SLC25A33的769P^{PIK+siRNA-SLC25A33}细胞及对照组769P^{PIK+siRNA-ctrl}细胞
            1.2.1 siRNA转染
            1.2.2 转染后细胞的鉴定
        1.3 细胞增殖实验
        1.4 细胞侵袭实验
        1.5 细胞凋亡实验
        1.6 蛋白印记实验
        1.7 实时定量PCR
        1.8 统计方法
    实验结果
        1.PIK(siRNA-空)细胞和PIK(siRNA-SLC)细胞中SLC25A33表达情况
        2.敲低SLC25A33可促进PIK细胞增殖
        3.敲低SLC25A33可促进PIK细胞的侵袭转移
        4.敲低SLC25A33可抑制PIK细胞的凋亡率
        5.PIK细胞表达p53明显高于PEGFP细胞且表达pAKT明显低于PEGFP细胞,而降低表达SLC25A33可抑制PIK细胞表达P53蛋白且促进其表达PAKT蛋白
        6.PIK细胞敲低SLC25A33后高表达DFFA
    讨论
    参考文献
第五章 p53及pAKT与PIK3CD-AS1抑制肾癌发生发展的关系
    细胞与方法
        1.1 细胞株
        1.2 构建下调表达p53的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)细胞和下调表达pAKT的PEGFP、PIK、PIK(空)、PIK(DFFA+)细胞
            1.2.1 siRNA转染
        1.3 细胞增殖实验
        1.4 细胞侵袭实验
        1.5 细胞凋亡实验
        1.6 统计方法
    实验结果
        1.细胞增殖实验
            1.1 p53可能是PIK细胞增殖活性明显低于PEGFP细胞的关键因素
            1.2 pAKT可能是PIK细胞增殖活性明显低于PEGFP细胞的关键因素
            1.3 p53可能是PIK(DFFA+)细胞增殖活性明显高于PIK(空)细胞的关键因素
            1.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)细胞增殖活性明显高于PIK(空)细胞的关键因素
        2.侵袭实验
            2.1 p53可能是PIK细胞侵袭能力明显低于PEGFP细胞的关键因素
            2.2 pAKT可能是PIK细胞侵袭能力明显低于PEGFP细胞的关键因素
            2.3 p53可能是PIK(DFFA+)细胞侵袭能力明显强于PIK(空)细胞的关键因素
            2.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)细胞侵袭能力明显强于PIK(空)细胞的关键因素
        3.凋亡实验
            3.1 p53可能是PIK细胞凋亡率明显高于PEGFP细胞的关键因素
            3.2 pAKT可能是PIK细胞凋亡率明显高于PEGFP细胞的关键因素
            3.3 p53可能是PIK(DFFA+)细胞凋亡率明显低于PIK(空)细胞的关键因素
            3.4 pAKT可能是PIK(DFFA+)细胞凋亡率明显低于PIK(空)细胞的关键因素
    讨论
    参考文献
第六章 结论与展望
综述
    参考文献
致谢



本文编号：3826644