IL23/Th17通路基因miR-SNPs与胃癌易感性关联分析及初步功能验证

发布时间：2023-06-03 03:17

　　胃癌(Gastric cancer,GC)作为常见的消化系统恶性肿瘤,在我国其发病率和病死率居高不下,对个人、社会及国家均已造成严重负担,是迫在眉睫的公共卫生问题。胃癌的发生是多种因素共同作用的结果,其中幽门螺杆菌(Heliobacter pylori,H.pylori)感染和遗传因素的相互作用越来越受到瞩目。在我国家族性胃癌仅占胃癌的1%-3%,其中90%以上为散发性胃癌,表现为较弱的遗传易感性,这很可能与基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)有关。国内外许多相关研究均证实炎性因子通路基因的多态性与胃癌前炎症反应密切相关。micro RNA(mi RNA)可通过与炎性因子相关基因的3’非翻译区(3’-UTR)靶向结合调控炎性基因表达。炎性基因3’-UTR的mi RNA靶序列中的SNP(mi R-SNP)可通过增强或减弱mi RNA对炎性基因的调控作用,诱导局部免疫反应,最终导致胃癌发生。目的探讨IL23/Th17炎症轴通路基因mi R-SNPs(IL17A rs3748067、IL17RA rs887796、IL17RA rs14...

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摘要
Abstract
英文缩略词表
1 前言
2 材料与方法
    2.1 常用实验试剂
    2.2 常用实验器材
    2.3 所需实验试剂的配制
    2.4 研究方法
        2.4.1 研究对象
        2.4.2 资料收集
        2.4.3 血样采集
        2.4.4 全血基因组DNA提取
        2.4.5 SNP及micro RNA的选定
        2.4.6 基因分型方法
        2.4.7 SNPs引物设计和限制性内切酶的选择
        2.4.8 PCR扩增和酶切反应的条件及基因型判定
        2.4.9 细胞转染
        2.4.10 RNA提取
            2.4.10.1 细胞收集
            2.4.10.2 RNA提取
        2.4.11 蛋白提取
        2.4.12 mi R-10a-3p及mi R-21 相对表达量的检测
        2.4.13 IL17A及PTEN相对表达量的检测
        2.4.14 Western-blot
        2.4.15 双荧光素酶验证实验
        2.4.16 质量控制
        2.4.17 统计学分析
3 结果
    3.1 胃癌病例组和对照组的一般特征
    3.2 基因型判定
        3.2.1 电泳图谱结果
        3.2.2 基因分型结果的质量控制
    3.3 四个位点与胃癌遗传易感性关联分析
    3.4 四个位点与胃癌遗传易感性关联的分层分析
    3.5 IL17RA基因rs1468488和rs887796位点的单体型分析
    3.6 突变位点数量分析
    3.7 基因-环境的交互作用分析
    3.8 细胞总RNA提取
    3.9 mi R-21 相对表达量的检测
    3.10 PTEN相对表达量的检测
    3.11 mi R-10a-3p相对表达量的检测
    3.12 IL17A相对表达量的检测
    3.13 Western-blot检测SGC-7901 和BGC-823 细胞中PTEN蛋白的表达
    3.14 Western-blot检测SGC-7901 和BGC-823 细胞中IL17A蛋白的表达
    3.15 hsa-mi R-10a-3p靶基因的双荧光素酶验证实验
        3.15.1 RT-PCR检测mi R-10a-3p本底表达情况
        3.15.2 mi R-10a-3p靶基因的双荧光素酶验证
4 讨论
    4.1 IL23/Th17通路与胃癌
    4.2 IL23/Th17通路相关基因mi R-SNPs与胃癌的关系
    4.3 mi R-10a-3p靶基因IL17A的验证
    4.4 本研究的优缺点
5 结论
6 参考文献
综述 新型非编码RNA在肿瘤中作用的研究进展
    参考文献
个人简历及学术论文发表情况
致谢



本文编号：3828556