NRP1基因敲除对放射性肺纤维化进程的影响及其作用机制

发布时间：2023-08-17 19:09

　　目的:观察神经菌毛蛋白1 (NRP1)基因对放射性肺纤维化(RIPF)进程的影响,并探讨其在Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads通路介导的上皮间质转化(EMT)发生发展过程和细胞外基质(ECM)沉积中的作用。方法:利用Cre-LoxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)特异性敲除NRP1基因的转基因C57BL/6J小鼠并进行鼠尾鉴定,将160只小鼠按照射后不同时间点随机分为4周组、8周组、16周组和24周组,每组小鼠按随机数字表法分为野生型(Con)组、野生型单纯照射(IR)组、NRP1基因特异性敲除(KO-Con)组和NRP1基因特异性敲除+照射(KO+IR)组,每亚组10只。KO-Con和KO+IR组小鼠腹腔注射他莫昔芬特异性敲除AT-Ⅱ细胞NRP1基因,IR组和KO+IR组小鼠采用20Gy全胸照射建立RIPF小鼠模型。模型构建完成后,利用HE染色法和Masson染色法验证模型是否构建成功;利用免疫组织化学(IHC)法检测小鼠肺组织中Ⅰ型胶原(ColⅠ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;Western ...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物、主要试剂和仪器
    1.2 实验分组和RIPF模型建立
    1.3 小鼠肺组织HE染色和Masson染色
    1.4 免疫组织化学法检测小鼠肺组织中ColⅠ和α-SMA蛋白表达
    1.5 Western blotting法检测小鼠肺组织中NRP1、TGF-β、Smad 2和β-catenin蛋白表达水平
    1.6 qRT-PCR法检测小鼠肺组织中NRP1、ColⅠ、α-SMA、β-catenin、TGF-β1、Smad2、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin)mRNA表达水平
    1.7 统计学分析
2 结果
    2.1 各组小鼠肺组织HE染色和Masson染色结果
    2.2 各组小鼠肺组织中NRP1蛋白和mRNA表达水平
    2.3 各组小鼠肺组织中ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表达水平
    2.4 各组小鼠肺组织中β-catenin、TGF-β1和Smad2蛋白和mRNA表达水平
    2.5 各组小鼠肺组织中E-Cadherin、N-Cadherin和Vimentin mRNA表达水平
3 讨论



本文编号：3842412