PARP抑制剂在AR阳性三阴性乳腺癌细胞增殖中的作用

发布时间：2017-05-21 17:20

  本文关键词：PARP抑制剂在AR阳性三阴性乳腺癌细胞增殖中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景与目的：三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)是指雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)及人类表皮生长因子受体2((human epidermal growth factor receptor-2, HER-2)表达均为阴性的一类乳腺癌,约占所有乳腺癌的15%左右。与其他类型乳腺癌相比,三阴性乳腺癌不能从内分泌治疗和抗HER-2治疗中获益,有着更高的死亡率、复发风险以及转移发生率。因此,寻找新的治疗策略,对提高三阴性乳腺癌患者预后至关重要。在三阴性乳腺癌中,雄激素受体(androgen receptor, AR)阳性的表达率为10%-15%,目前已有临床研究证明抗雄治疗在三阴性乳腺癌中的肯定效果。乳腺癌易感基因1 (breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1)在三阴性乳腺癌中的突变率为10.6%-19.8%,在散发型三阴性乳腺癌中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(poly (ADP-ribose) polymerase 1, PARP1)抑制剂的治疗效果不明显,但在BRCA1突变的三阴性乳腺癌中取得了阳性结果。本研究目的是利用体内、外模型及临床组织标本,探讨在AR阳性的三阴性乳腺癌中,BRCA1和PARP1的关系,并且初步探讨其作用的相关调控机制,最后在临床患者中验证其相互关系,并为临床上AR阳性三阴性乳腺选择靶向联合内分泌治疗提供基础理论依据。材料和方法：本实验选取两株不同类型的三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231 (AR阳性,BRCA1野生型)和HCC1937 (AR阳性,BRCA1突变型)。28例三阴性乳腺癌患者组织芯片为研究对象。1.通过MTT、克隆形成、流式细胞术检测比卡鲁胺和ABT-888联合用药对AR阳性的TNBC细胞增殖、凋亡影响。2.通过基因转染、qPCR以及蛋白免疫印迹实验检测BRCA1对AR和PARP1表达水平的影响。3.通过qPCR和蛋白免疫印迹实验检测AR和PARP1的相互作用。4.构建裸鼠皮下移植瘤模型,绘制肿瘤生长曲线,检测比卡鲁胺和ABT-888联合作用与单药作用抑制肿瘤增殖效果的差异,并通过免疫组化染色检测AR、PARP1、Ki67的表达差异。5.通过对28例TNBC患者组织芯片的免疫组化染色实验,检测乳腺癌组织中BRCA1、AR和PARP1的表达情况,利用相关统计学分析法分析BRCAl与AR、PARP1之间的表达关系。结果：1.在AR阳性的TNBC中,与比卡鲁胺或ABT-888单药组相比,联合用药组可以更有效的抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。2.瞬时转染BRCA1过表达质粒,通过qPCR以及蛋白免疫印迹实验发现AR和PARP1在mRNA和蛋白水平的表达均下调。3.利用瞬时转染和药物诱导或抑制,AR可以上调PARP1的mRNA和蛋白表达,同时PARP1也可以上调AR的mRNA和蛋白表达水平。4.在HCC1937构建的裸鼠皮下移植瘤模型中,与比卡鲁胺或ABT-888单药组相比,联合用药组可以更有效的抑制肿瘤增殖。5.在AR阳性的TNBC中,比卡鲁胺和ABT-888的联合作用可能与BRCA1的状态有关,在BRCA1突变时,联合作用抑制肿瘤增殖的效果更明显。6.在28例TNBC患者组织芯片的免疫组化结果显示,BRCA1的表达与AR (r=-2.694,P=0.011)和PARP1 (r=-2.324, P=0.046)表达呈负相关关系。结论：综上所述,本研究证明了BRCA1的过表达可以下调AR和PARP1的mRNA和蛋白水平。而AR作为一个上游的调控因子上调PARP1,同时PARP1也可以上调AR。并且TNBC患者中,验证了BRCA1的表达与AR和PARP1的表达呈负相关关系。研究表明在AR阳性的TNBC中,比卡鲁胺和ABT-888的联合用药可以增强抗肿瘤增殖作用,为临床AR阳性的TNBC患者靶向联合内分泌治疗的潜在治疗策略提供了基础理论依据。
【关键词】：雄激素受体 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶1 乳腺癌易感基因1 联合治疗 三阴性乳腺癌
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 缩略词表(Abbreviations)6-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 第一章 实验材料15-18
• 1.1. 细胞株15
• 1.2. 质粒15
• 1.3. 乳腺癌组织芯片15
• 1.4. 材料与仪器15-16
• 1.5. 药品与试剂16-18
• 第二章 实验方法18-28
• 2.1. 细胞培养方法及药物配制18
• 2.2. 质粒的扩增及提取18-19
• 2.3. MTT法检测细胞增殖19
• 2.4. ANNEXINV/PI染色检测细胞凋亡19-20
• 2.5. 平板克隆形成实验20
• 2.6. 瞬时转染20-21
• 2.7. 总蛋白质的提取与浓度测定21
• 2.8. RT-PCR21-23
• 2.9. 蛋白质免疫印迹(WESTERN BLOTTING)23-26
• 2.10. 免疫组化26-27
• 2.11. 统计学分析27-28
• 第三章 实验结果28-38
• 3.1 体外实验验证在AR阳性的TNBC中比卡鲁胺和ABT-888联合作用抑制细胞增殖、促进细胞凋亡28-30
• 3.2 BRCA1过表达下调AR和PARP1的表达30-32
• 3.3 AR可以上调PARP1,同时PARP1也可以上调AR的表达32-34
• 3.4 比卡鲁胺和ABT-888联合作用抑制肿瘤增殖34-36
• 3.5 比卡鲁胺和ABT-888的联合作用可能与BRCA1的状态相关,在BRCA1突变时,联合作用抑制肿瘤增殖的效果更好36
• 3.6 在TNBC病人中,BRCA1的表达与AR和PARP1负相关36-38
• 第四章 讨论38-41
• 第五章 结论和展望41-42
• 参考文献42-45
• 综述一45-54
• 参考文献51-54
• 综述二54-61
• 参考文献58-61
• 作者简介及攻读取成果61-62
• 致谢62-63

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄河;曹阳;吴英理;阎骅;;PARP抑制剂联合化疗药物治疗恶性肿瘤的研究进展[J];肿瘤;2013年04期

2 韩炜;钟俊;王永峰;王国成;尤启冬;;PARP抑制剂用于肿瘤治疗的研究进展[J];中国新药杂志;2011年12期

3 郭伟;张木勋;;PARP抑制剂对早期糖尿病大鼠肾脏的保护作用[J];中国医师杂志;2006年05期

4 丁焕;孙颖;黎晓晴;黎莉;;PARP抑制剂联合吉西他滨或多西他赛对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响[J];山东大学学报(医学版);2014年01期

5 王书博;潘文婧;李委佳;刘巍;谭文华;;PARP抑制剂在上皮性卵巢癌中的研究进展[J];中国优生与遗传杂志;2012年09期

6 刘志学;;默克与百济神州再度携手 双方在京签署PARP抑制剂全球共同开发和商业化协议[J];中国医药导报;2013年34期

7 郭伟;张木勋;;PARP抑制剂对糖尿病大鼠早期神经病变的影响[J];天津医药;2006年10期

8 秦艳;王娅兰;李圆圆;;PARP抑制剂对小鼠结肠腺癌CT26细胞肝转移的影响[J];第三军医大学学报;2008年14期

9 马强;郝吉庆;;PARP抑制剂对非小细胞肺癌A549及H460细胞增殖及凋亡的影响[J];现代肿瘤医学;2013年04期

10 ;[J];;年期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 谢江娇;PARP抑制剂延缓高同型半胱氨酸血症诱导ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块进展[D];华中科技大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 骆佳艳;PARP抑制剂在AR阳性三阴性乳腺癌细胞增殖中的作用[D];南京大学;2016年

2 张文婷;PARP抑制剂的设计、合成与神经保护活性研究[D];华中科技大学;2007年

3 王哲;PARP抑制剂对卵巢癌C13*细胞增殖、侵袭的影响及其机制探讨[D];山东大学;2013年

4 余芳;PARP抑制剂在阿霉素诱导的多发性骨髓瘤细胞自噬发生中的功能研究[D];第四军医大学;2011年

5 郭伟;PARP抑制剂对糖尿病大鼠早期神经病变的影响[D];华中科技大学;2006年

6 丁焕;转染INPP4B基因联合PARP抑制剂对雄激素抵抗型前列腺癌PC3细胞的影响[D];山东大学;2014年

  本文关键词：PARP抑制剂在AR阳性三阴性乳腺癌细胞增殖中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：384321