新型小分子化合物NL101对B细胞淋巴瘤的抑制作用及其机制研究

发布时间：2023-09-03 20:16

　　研究背景非霍奇金淋巴瘤(NHL)是最常见的成人血液肿瘤,在过去的三十年中,发病率持续上升。在所有非霍奇金淋巴瘤病例中,大约85%NHL都起源于B淋巴细胞。尽管利妥昔单抗联合化疗改善了B细胞淋巴瘤(B-NHL)的总体疗效和预后,但仍有部分病例原发耐药或者复发难治,此外药物副反应也是限制化疗效果的因素之一。因此,开发新的高效低毒药物治疗B细胞淋巴瘤很有必要。NL101是兼具苯达莫司汀和组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)结构特征的新型小分子化合物,前期研究提示NL101具有较高的抗肿瘤活性,毒副作用轻,本研究将明确NL101对B细胞淋巴瘤的抑制作用,初步阐明其作用机制,为其在淋巴瘤的临床试验提供实验依据。研究方法为了明确NL101对B-NHL的增殖抑制作用,我们采用MTT法检测NL101对BNHL细胞系和原代细胞增殖的影响,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,WB或q-PCR检测DNA损伤通路和B-NHL关键生存因子的表达。建立NOD-SCID小鼠淋巴瘤移植模型,观察NL101对体内抗瘤作用并随访小鼠的生存。为了探讨NL101的作用机制,RNA-seq检测NL101导致的基因表达谱改变,筛选出差...

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

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致谢
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缩略语表
引言
1 NL101具有显著的B-细胞淋巴瘤抑制作用
    1.1 前言
    1.2 实验材料
        1.2.1 主要实验设备及耗材
        1.2.2 实验试剂
        1.2.3 溶液配置
        1.2.4 B-细胞淋巴瘤细胞系
        1.2.5 原代细胞
        1.2.6 动物
    1.3 实验方法
        1.3.1 B-细胞淋巴瘤细胞系培养
        1.3.2 原代淋巴细胞的分离和培养
        1.3.3 MTT检测细胞存活情况
        1.3.4 流式细胞学检测细胞周期
        1.3.5 流式细胞学AV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
        1.3.6 WB检测细胞相关蛋白的表达水平
        1.3.7 NOD-SCID异体淋巴瘤模型小鼠的构建及处理
        1.3.8 小鼠瘤块的免疫组化
    1.4 实验结果
        1.4.1 NL101对B-细胞淋巴瘤细胞系存在普遍抑制作用
        1.4.2 NL101显著抑制原代B细胞淋巴瘤细胞
        1.4.3 NL101将淋巴瘤细胞阻滞在G0/G1期
        1.4.4 NL101可诱导B细胞淋巴瘤细胞发生凋亡
        1.4.5 NL101 通过激活Caspase途径诱导细胞凋亡
        1.4.6 NL101抑制小鼠淋巴瘤的生长并延长其生存期
    1.5 小结与讨论
    1.6 结论
2 miR-21-Mxd1-c-Myc调节通路参与NL101对B-NHL的抑制过程
    2.1 NL101 抑制miR-21 的表达及miR-21在B-NHL的意义
        2.1.1 前言
        2.1.2 实验材料
        2.1.3 实验方法
        2.1.4 研究结果
        2.1.5 小结与讨论
        2.1.6 结论
    2.2 Mxd1为miR-21在B-NHL中的靶基因
        2.2.1 前言
        2.2.2 实验材料
        2.2.3 实验方法
        2.2.4 实验结果
        2.2.5 小结与讨论
        2.2.6 结论
    2.3 Mxd1与c-Myc在 B-NHL中的相关性
        2.3.1 前言
        2.3.2 实验材料
        2.3.3 实验方法
        2.3.4 研究结果
        2.3.5 小结与讨论
        2.3.6 结论
    2.4 c-Myc调节miR-21 的表达
        2.4.1 前言
        2.4.2 实验材料
        2.4.3 实验方法
        2.4.4 研究结果
        2.4.5 小结与讨论
        2.4.6 结论
参考文献
综述 microRNA在B细胞淋巴瘤中的作用
    参考文献
作者简历及科研成果



本文编号：3845711