MicroRNAs作为循环HPV-DNA阳性非小细胞肺癌生物标志物的价值研究

发布时间：2023-12-02 12:49

　　目的:本研究拟筛选出针对HPV-DNA的高效通用引物,并利用该引物检测循环HPV-DNA以进一步探讨其对于非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者的潜在风险,继而在此基础上初步探索microRNAs(miRNAs)在循环HPV-DNA阳性NSCLC患者血浆中的表达,分析异常表达miRNAs对于鉴定循环HPV-DNA阳性NSCLC的潜在价值。方法:1.通过比较6对通用引物检测9种常见型别HPV-DNA的效果,选取检测效果最佳的通用引物用于后续循环HPV-DNA筛选的实验中。2.纳入100例NSCLC患者,收集其外周血标本进行HPV-DNA检测,再使用HPV特异性巢氏引物方法和基因测序方法对其进行分型。3.结合患者的临床和病理资料,对血液循环中HPV-DNA的存在与NSCLC患者临床病理特征之间的关系进行统计分析。4.基于TCGA数据库初步筛选NSCLC中差异性表达明显的miRNAs。并采用实时荧光定量PCR方法分别检测循环HPV-DNA阳性NSCLC患者、循环HPV-DNA阴性NSCLC患者及健康对照组血浆中差异性miRNAs的表达水平。5.通...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要缩略词表
第一章 绪论
    1.1 研究背景
        1.1.1 非小细胞肺癌
        1.1.2 人乳头瘤病毒与肿瘤
        1.1.3 循环HPV-DNA与肿瘤
        1.1.4 HPV的检测方法
        1.1.5 循环微小RNAs(microRNAs,miRNAs)与肿瘤
    1.2 本研究的目的、内容、技术路线和意义
        1.2.1 研究目的
        1.2.2 研究内容
        1.2.3 技术路线图
        1.2.4 研究意义
第二章 6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析
    2.1 材料
        2.1.1 主要仪器
        2.1.2 主要试剂及耗材
        2.1.3 通用引物
    2.2 实验方法
        2.2.1 标本收集
        2.2.2 HPV-DNA提取
        2.2.3 HPV-DNA检测和分型
        2.2.4 通用引物合成及稀释
        2.2.5 通用引物的PCR扩增反应
        2.2.6 琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物
    2.3 结果
        2.3.1 HPV基因分型检出情况
        2.3.2 6对通用引物检测HPV-DNA的阳性率比较
        2.3.3 通用引物检测不同型别HPV结果
    2.4 讨论
第三章 血液循环中HPV-DNA的检出率及与NSCLC患者临床病理特征的关系研究
    3.1 材料
        3.1.1 研究对象
        3.1.2 研究对象的纳入和排除标准
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 主要试剂及耗材
    3.2 实验方法
        3.2.1 采血与分离血浆
        3.2.2 血液标本基因组DNA提取
        3.2.3 组织标本基因组DNA提取
        3.2.4 血液和组织基因组DNA纯度和浓度检测
        3.2.5 HPV通用引物检测
        3.2.6 HPV特异性巢氏引物鉴定
        3.2.7 HPV-DNA阳性标本测序鉴定
        3.2.8 统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 NSCLC患者外周血中HPV-DNA的检测结果
        3.3.2 HPV通用引物PCR产物测序比对结果
        3.3.3 血液循环中HPV16-DNA的存在与NSCLC患者临床病理参数的关系
        3.3.4 评估HPV16-DNA在外周血和肺肿瘤组织中存在的相关性
    3.4 讨论
第四章 MicroRNAs作为循环HPV-DNA阳性NSCLC潜在生物标志物的评估
    4.1 材料
        4.1.1 研究对象
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 主要试剂及耗材
    4.2 实验方法
        4.2.1 数据库分析
        4.2.2 血浆总RNA提取
        4.2.3 总RNA的浓度和纯度测定
        4.2.4 MicroRNA的引物设计
        4.2.5 MicroRNA特异性的上游引物序列合成
        4.2.6 实时荧光定量RT-PCR反应(Poly加尾法)
        4.2.7 数据的处理和分析
    4.3 结果
        4.3.1 基于TCGA筛选肺腺癌和肺鳞癌差异性表达明显的miRNAs
        4.3.2 血浆中NSCLC差异性miRNAs的表达水平
        4.3.3 MiRNA单一和联合检测对鉴别循环HPV16-DNA(+)NSCLC患者和正常对照人群的能力比较
        4.3.4 MiRNA单一和联合检测区分循环HPV16-DNA(+)NSCLC和循环HPV16-DNA(-)NSCLC的能力比较
    4.4 讨论
第五章 结论
参考文献
致谢
在学期间发表的学术论文、参加的课题及学术会议
    一、已发表的学术论文
    二、参加的课题
    三、参加的学术会议



本文编号：3869704