A438079靶向抑制P2X7受体在结直肠癌治疗中的作用及其分子机制研究

发布时间：2024-06-03 01:51

　　目的:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是发病率为全球第三位的恶性肿瘤,也是致死率为第四位的恶性肿瘤。近20年来,我国结直肠癌的发病率与死亡率呈逐年递增趋势。在初诊时约有25%的患者即被诊断为晚期结直肠癌,而约50%的接受结直肠癌根治手术的早期患者也会进展成为晚期结直肠癌。晚期结直肠癌的治疗效果至今仍不能令人满意,即使接受过化疗及靶向治疗,许多患者仍因疾病迅速进展而死亡。因此,进一步分析结直肠癌的基因组信息,发现并筛选出预测早期肠癌的新的生物标志物,深入研究结直肠癌的发生发展、侵袭和转移的分子机制,对于改善结直肠癌的早期诊治效果,降低结直肠癌的患病率与死亡率具有重要意义。P2X7受体(P2X7R)由位于人类染色质12上的P2rx7基因编码,有13个外显子,编码595个氨基酸组成的膜蛋白。它属于P2X受体家族,该家族的成员可以被细胞外三磷酸腺苷(ATP)激活。P2X7R在不种类型的细胞中都有表达,参与调节炎症,细胞增殖和调亡,新陈代谢和吞噬作用。P2X7R在多种类型的肿瘤中都有异常改变,它与肿瘤的进展、迁移和侵袭高度相关。大多数研究发现P2X7R在许多肿瘤中呈高表达,...

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :P2X7受体在人结直肠癌中的表达及与预后转移的关系
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 实验动物,主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 研究对象
            2.2.1 临床标本及实验分组
            2.2.2 细胞系及实验分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 免疫组化法检测P2X7受体在不同的临床标本中的表达
            2.3.2 细胞培养
            2.3.3 Western-blot法检测P2X7 受体蛋白
            2.3.4 Real-time PCR(q RT-PCR)法检测P2X7 受体的m RNA
            2.3.5 统计学分析
    3 结果
        3.1 P2X7R在结直肠癌组织和癌旁正常结直肠组织中的表达
        3.2 P2X7R的表达与结直肠癌临床病理特征之间的关系
        3.3 P2X7R的表达与结直肠癌预后的关系
        3.4 P2X7R表达与结直肠癌标志物之间的联系
        3.5 P2X7R表达与结直肠癌转移的关系
        3.6 P2X7R在结直肠转移癌细胞系中的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :体外实验中A438079对结直肠癌细胞增殖、迁移、凋亡及焦亡的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究对象及实验分组
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 实验分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 培养结直肠癌细胞,加入抑制剂A438079
            2.3.2 CCK-8 法检测HCT-116、SW620 细胞增殖
            2.3.3 细胞划痕实验
            2.3.4 Transwell法检测HCT-116、SW620 细胞的迁移与侵袭
            2.3.5 流式细胞仪检测HCT-116、SW620 细胞的凋亡(Annexin V-FITC/PI双染法)
            2.3.6 Western-blot法检测HCT-116、SW620 细胞的凋亡、焦亡通路的相关蛋白表达
            2.3.7 q RT-PCR检测HCT-116、SW620 细胞的凋亡通路的相关基因m RNA表达
            2.3.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 A438079影响结直肠癌细胞的形态
        3.2 A438079抑制结直肠癌细胞的增殖
        3.3 A438079抑制结直肠癌细胞的侵袭及迁移
            3.3.1 Transwell小室法检测对结直肠癌细胞侵袭的影响
            3.3.2 Transwell法检测对结直肠癌细胞迁移的影响
            3.3.3 划痕实验检测对结直肠癌细胞迁移的影响
        3.4 A438079促进结直肠癌细胞的凋亡
        3.5 A438079 通过Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信号通路促进细胞凋亡
            3.5.1 A438079对凋亡相关蛋白的作用
            3.5.2 A438079对凋亡相关基因mRNA的作用
        3.6 A438079 通过NLRP3/Caspase1 信号通路抑制细胞焦亡
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :体内实验中A438079对结直肠癌生长、凋亡及焦亡的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 主要溶液配制
        2.2 研究对象及实验分组
            2.2.1 研究对象
            2.2.2 实验分组
        2.3 实验方法
            2.3.1 建立结直肠癌细胞SW620荷瘤鼠模型
            2.3.2 HE染色法检测裸鼠移植瘤组织的形态学变化
            2.3.3 TUNEL法检测移植瘤组织的凋亡(显色法)
            2.3.4 Western-blot法检测裸鼠移植瘤组织凋亡、焦亡通路的相关蛋白表达
            2.3.5 统计学分析
    3 结果
        3.1 A438079能够抑制裸鼠结直肠癌移植瘤的生长
        3.2 A438079未影响荷瘤裸鼠的体重增长
        3.3 A438079促进了裸鼠结直肠癌移植瘤组织的凋亡
        3.4 A438079 通过Bcl-2/Caspase9/Caspase3 信号通路促进细胞凋亡
        3.5 A438079 通过NLRP3/Caspase1 信号通路抑制细胞焦亡
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3987992