3-溴丙酮酸联合顺铂抑制肺癌细胞株A549生长的实验研究

发布时间：2017-05-31 15:00

  本文关键词：3-溴丙酮酸联合顺铂抑制肺癌细胞株A549生长的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景目前肺癌已成为我国乃至全球范围内发病及死亡率均居首位的恶性肿瘤,并且其发病率和死亡率呈日益上升的态势[1-2],以表皮生长因子选择性酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI)为代表的分子靶向治疗的应用,尽管取得了引人瞩目的疗效,但紧接着出现的耐药使其治疗陷入瓶颈[3-4]。近年来研究表明恶性肿瘤细胞中糖酵解明显增强,且糖酵解在肿瘤的发生、发展中扮演着重要角色[5-6],大量研究显示通过抑制异常糖酵解可抑制多种肿瘤生长,甚至可杀死肿瘤细胞,3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-Br PA)作为己糖激酶抑制剂这种抑制作用尤为明显,并有望作为新型抗肿瘤药物用于临床。目前关于3-Br PA对肺癌作用的研究国内外极为少见,其对肺癌作用的具体机制也不清楚。本实验研究拟观察3-BrPA、顺铂单用及联用对肺癌细胞株A549增殖的影响,并初步探讨3-Br PA对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其可能机制。目的观察3-Br PA、顺铂单用及联用对肺癌细胞株A549增殖的影响,并初步探讨3-BrPA对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其可能机制。方法1应用CCK-8(cell counting kit-8)法观察不同浓度的顺铂、3-Br PA单用及联用处理的A549、MRC-5细胞在24h、48h、72小时的增殖情况。2选择低于IC50(half maximal inhibitory concentration,半抑制浓度)的3-BrPA(40μmol/L)与顺铂(1 mg/L)单独及联合作用于A549细胞,用药48 h后在倒置相差显微镜下观测各组A549细胞的形态变化,使用流式细胞仪测定各组A549细胞的凋亡率;流式细胞仪分析不同浓度的3-BrPA处理A549细胞48 h后各组细胞周期分布,并计算细胞增殖指数。3不同浓度的3-Br PA处理A549细胞48h后,应用己糖激酶(hexokinase,HK)检测试剂盒检测3-BrPA对各组细胞内己糖激酶活性的影响。结果13-brpa对a549细胞生长的影响:当3-brpa浓度高于20μmol/l时,与阴性对照组比较,其对a549细胞具有明显的抑制作用(p0.01),并且随着3-brpa浓度的增高、作用时间延长,其增殖抑制作用明显增强(p0.05)。且与单用3-brpa、顺铂组比较,联合用药组对a549细胞的增殖抑制作用显著增强(p0.01)。3-brpa对mrc-5细胞增殖的影响:cck-8结果显示,与阴性对照组比较,当浓度在0~80μmol/l范围内时,3-brpa对mrc-5细胞无明显增殖抑制作用(p0.05),而当3-brpa的浓度范围为80-160μmol/l时对mrc-5仅有轻微抑制作用,3-brpa对a549细胞的抑制作用在同时间点以及同浓度均显著高于其对mrc-5细胞的抑制作用(p0.01)。2倒置相差显微镜观察到用药处理a549细胞48h后,3-brpa组表现为大多数细胞呈现凋亡改变,而联合用药组凋亡细胞数量更多,且凋亡改变更加明显,部分区域甚至呈现细胞碎片、空泡化改变等细胞坏死征象;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,与对照组的a549细胞凋亡率(8.103±2.590)%相比较,顺铂组(20.700±5.172)%、3-brpa组(53.417±5.259)%和3-brpa与顺铂联用组(77.953±3.587)%的细胞凋亡率均显著增高(p0.01),而联合用药组细胞凋亡率较单一用药组显著增高(p0.01);流式细胞仪分析不同浓度的3-brpa处理a549细胞48h后的细胞周期结果提示随着3-brpa浓度增高,处于g1期的a549细胞明显增多(p0.01),同时处于s期的a549细胞明显减少(p0.01),细胞较多的被阻滞于g1期,而s期和g2/m期细胞比例显著下降,a549细胞的增殖指数随3-brpa浓度增高而降低。3不同浓度的3-brpa作用于a549细胞48h后:己糖激酶活性检测结果显示用药组细胞内己糖激酶活性显著低于阴性对照组,且随着3-brpa浓度增高,细胞内己糖激酶活性逐渐降低。结论13-brpa具有抑制肺癌a549细胞增殖的作用、并且与顺铂联用具有协同抗肺癌a549细胞的增殖作用,同时低浓度3-brpa对正常细胞mrc-5细胞作用不明显,仅高浓度时有轻微抑制作用,提示3-brpa具有明显抑制肺癌a549细胞增殖的作用,但对正常细胞mrc-5的毒性作用却不明显,并且与顺铂联用具有协同抗a549细胞增殖的作用。23-brpa具有诱导a549细胞凋亡的作用,同时具有延缓细胞周期进程进而抑制细胞增殖的作用。3 3-Br PA具有降低A549细胞内己糖激酶活性的作用,并且随其浓度增加,己糖激酶活性逐渐下降。以上研究提示,在体外3-Br PA具有抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡,延缓细胞周期进程的作用,且与化疗药物有协同作用,但对正常细胞MRC-5影响却较小。其机制可能与3-Br PA抑制肺癌细胞内己糖激酶活性、阻断其糖酵解进程,进而使肺癌细胞能量代谢受到影响有关。
【关键词】：肺癌 3-溴丙酮酸 糖酵解 己糖激酶
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 英汉缩略词对照表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 1. 前言11-13
• 2. 实验材料、试剂、设备13-15
• 3. 实验方法15-21
• 4. 结果21-31
• 5. 讨论31-35
• 全文总结35-36
• 参考文献36-40
• 文献综述 3-溴丙酮酸抗肿瘤研究进展40-47
• 参考文献44-47
• 攻读硕士期间发表的文章47-48
• 致谢48

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1 黄筠;魏莉;熊一向;;艾灸血清对人肺腺癌细胞株A549体外生长的影响[J];中国中医基础医学杂志;2010年12期

2 李文艳;朱s，

本文编号：409779