慢病毒介导反义CK13基因对鼻咽癌移植瘤放疗前后的影响

发布时间：2017-06-07 17:07

  本文关键词：慢病毒介导反义CK13基因对鼻咽癌移植瘤放疗前后的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目 的]分析慢病毒介导反义CK13基因对裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤放疗前后细胞周期及凋亡的影响,论证反义CK13基因在鼻咽癌治疗中有降敏作用,为CK13基因在鼻咽癌治疗中的作用提供实验基础。[方 法]本实验先培养细胞,再进行动物实验。动物实验分成O、H两组来进行。1、含目的基因NPC动物模型O组(A1：HNE1细胞；B1：转染空载体HNE1细胞；C1：转染anti-CK13a的HNE1细胞；D1：转染anti-CK13b的HNE1细胞)。2、NPC动物模型局部注射质粒H组(A2：对照组,注射生理盐水；B2:空质粒组,注射空慢病毒质粒；C2:反义CK13a组,注射反义CK13a慢病毒质粒；D2：反义CK13b组,注射反义CK13b慢病毒质粒)。3、放疗,并测量放疗前后肿瘤体积。4、处死小鼠,并取荷瘤小鼠肿瘤组织予以HE、Western blot、PCR和Tunel等检测。5、结果进行统计学分析。[结 果]1、实验期间所有裸鼠无死亡情况,存活率为100%；种瘤后腋下均形成明显肉眼可见的移植瘤,成瘤率为100%。两组移植瘤病检显示均呈现低分化鳞癌。2、通过计算瘤体体积,我们发现实验组(C1、D1、C2、D2)肿瘤生长体积较对照组(A1、A2)、空载体组(B1、B2)明显增大,差异具有统计学意义(P0.05)。3、检测细胞周期发现,A1、A2组和B1、B2组均无G1期阻滞,出现短暂S期阻滞,有明显的G2/M期阻滞；而C1、C2组和D1、D2组与A1、A2和B1、B2两组相比,S期阻滞没有显著变化,但G2/M期阻滞峰值明显增强,阻滞时间延长,有极显著的统计学意义(P0.05)。4、Tnuel检测结果显示,A1、B1组的癌组织凋亡率分别为46.52±5.55%和45.30±9.10%,两组相比无显著性差异(P0.05)；而C1组和D1组的癌组织中凋亡率分别为19.48±2.89%和26.08±11.67%，两组相比无显著性差异(P0.05)。C1、D1组与A1、B1组比较癌组织凋亡率明显下降(P0.05)。在H组中,我们发现了同样的趋势。5、Westernblotting检测结果显示,放射后A1、A2组和B1、B2组中caspase-3和PARP二者的剪切体表达水平明显升高,而反义CK13处理组(C1、C2组和D1、D2组)剪切体的水平较对照组(A1、A2组和B1、B2组)的表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。6、RT-qPCR检测细胞周期信号通路相关因子mRNA水平的变化,结果显示CK13可能与ATM和Chk2的下游信号因子通路密切相关,并且能够调控Cdc25c进行让鼻咽癌在辐射条件下阻滞于G2/M期。[结论]反义CK13基因能够显著降低鼻咽癌HNE1细胞株的放射敏感性,其作用机制可能通过延长细胞周期及减少细胞凋亡来降低鼻咽癌HNE1细胞的放射敏感性,间接证明CK13基因能够提高鼻咽癌HNE1细胞的放射敏感性；同时我们还发现CK13基因可通过调控Cdc25c信号通路使鼻咽癌在辐射条件下阻滞于G2/M期,为CK13基因成为NPC治疗的靶向基因提供实验依据。
【关键词】：细胞角蛋白13基因的反义寡核苷酸 鼻咽癌 细胞周期 凋亡 放射敏感性
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 缩略词表(以字母顺序排列)5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-36
• 结果36-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 参考文献51-56
• 综述56-63
• 参考文献60-63
• 攻读学位期间获得的学术成果63-64
• 致谢64

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 汪碧琼;陶华林;杨样;丁银环;;裸鼠皮下人鼻咽癌移植瘤模型体内差异表达蛋白的检测[J];现代预防医学;2009年15期

2 吴四海;俞晨杰;;鼻咽癌移植瘤动物模型的建立及其肿瘤生物学特性观察[J];齐齐哈尔医学院学报;2007年18期

3 谢莹;黄光武;韦正波;张哲;温文胜;;5-ALA光动力疗法治疗裸鼠鼻咽癌移植瘤的疗效观察[J];中国激光医学杂志;2009年02期

4 袁建伟;冯彦林;冼伟均;范凌霄;贺小红;袁白虹;黄克敏;苏少弟;刘艳;;临床PET-CT在裸鼠鼻咽癌移植瘤动物模型中的应用[J];解剖学研究;2009年05期

5 曹世龙,王振华,姚伟强,黄抗美,李栋良,李焕蓉,蒋娉婷,张凤坤,沈瑾,周决,倪洪珍,沈晓岚;照射后裸鼠人体鼻咽癌移植瘤(NPC—837)的生长延迟[J];中国放射肿瘤学;1990年03期

6 任均田，梁维佳，李峰，谢春霖;单克隆抗体BAC5在低分化鼻咽癌移植瘤的分布研究[J];细胞与分子免疫学杂志;1996年03期

7 杨洪斌;覃纲;李祖茂;徐宁;文艳君;梁传余;;HNP1基因转染对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长影响的实验研究[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2008年03期

8 闵玲,周克元,梁统,张月飞;Bcl-xl反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究[J];中华肿瘤杂志;2004年01期

9 张磊;刁鹏;黄建鸣;李涛;查晓;郎锦义;;放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长抑制作用[J];肿瘤预防与治疗;2008年01期

10 杜彩文,李德锐,林英城,吴名耀;三氧化二砷治疗Scid小鼠鼻咽癌移植瘤的初步实验研究[J];肿瘤防治杂志;2002年04期

中国重要会议论文全文数据库 前5条

1 周菊英;徐晓婷;秦颂兵;涂_g;;人重组血管内皮抑素对裸鼠皮下鼻咽癌移植瘤放射增敏的实验研究[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

2 杨洪斌;;人防御素HNP-1基因转染对裸鼠鼻咽癌移植瘤生长影响的实验研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

3 钟兴;徐浩;弓健;郭斌;;扩散加权磁共振成像早期评价hNIS转染鼻咽癌移植瘤~(131)I治疗效果的研究[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

4 徐婧;邱元正;唐瑶云;肖健云;田勇泉;赵素萍;;VP3基因对鼻咽癌移植瘤抑瘤效应的体内实验研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

5 张磊;黄建鸣;刁鹏;查晓;李涛;郎锦义;;放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长的抑制作用[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 杨洪斌;人防御素HNP-1基因转染对y|鼠鼻咽癌移植瘤生长影响的实验研究[D];四川大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 苗春雨;慢病毒介导反义CK13基因对鼻咽癌移植瘤放疗前后的影响[D];昆明医科大学;2016年

2 郑怡;一种带新型修饰配体的金纳米杆的组织分布和急性毒性试验及其在红外热疗辅助下对鼻咽癌移植瘤抑制作用的体内研究[D];浙江大学;2014年

3 张艳玲;拓扑替康对鼻咽癌移植瘤时辰放射增敏作用的机制研究[D];泸州医学院;2012年

4 李金利;重组人血管内皮抑素对裸鼠鼻咽癌移植瘤放射增敏效应的实验研究[D];苏州大学;2010年

5 钱莹;靶向纳米造影剂C225-USPIO标记裸鼠鼻咽癌移植瘤MR成像研究[D];华中科技大学;2011年

  本文关键词：慢病毒介导反义CK13基因对鼻咽癌移植瘤放疗前后的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：429704