抑制脂肪酸合酶诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制

发布时间：2017-06-23 13:06

  本文关键词：抑制脂肪酸合酶诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的脂肪酸的代谢是细胞生命活动中的重要一环,对于癌细胞来说尤为重要,因为不停生长的癌细胞需要大量脂肪酸来组成它们的膜系统。脂肪酸合酶(FAS,fatty acid synthase)是脂肪酸合成过程中的一个关键酶,几乎所有癌细胞都高表达FAS,而相比之下在绝大多数正常组织的细胞中FAS则难以发现,和临床有着密切联系。我们的前期研究表明乳腺癌细胞中存在着异常的脂肪酸合成---氧化循环代谢平衡,而且这个平衡对乳腺癌细胞的生长是必须的。本课题以乳腺癌细胞系为基本模型,研究抑制脂肪酸合酶诱导乳腺癌细胞死亡的分子机制,从而揭示异常脂肪酸代谢对于肿瘤的发生发展过程的意义。方法1.利用Western blot技术检测脂肪酸合成关键酶(FAS)在不同乳腺癌细胞系,不同组癌旁和癌组织中的表达水平。2.利用细胞计数法记录不同细胞系增殖情况,判断乳腺癌细胞系内脂肪酸代谢是否与细胞增殖速度的快慢有关系。3.脂肪酸代谢关键酶抑制剂(Cerulenin、Orlistat)以及sh RNA处理乳腺癌细胞抑制脂肪酸的合成,检测对其影响。4.用FAS特异性抑制剂Cerulenin处理,DCFH-DA探针、DHE探针测定细胞内ROS水平。5.使用抗氧化剂NAC、Trolox、BHA以及过氧化氢氧化酶抑制剂DPI是否能保护抑制FAS诱导的细胞凋亡。6.细胞流式检测线粒体膜势能变化以及细胞色素C的释放。7.过表达Bcl-2家族基因中的Bcl-2、Bclxl能否保护抑制脂肪酸合成诱导的凋亡。结果1.Western blot技术检测显示乳腺癌组织,乳腺癌细胞系中高表达FAS。2.乳腺癌细胞中脂肪酸合成酶的表达和细胞生长无正相关性。3.使用脂肪酸合成酶抑制剂能抑制肿瘤细胞的生长,甚至杀死肿瘤细胞。4.Knock down FAS抑制乳腺癌细胞的生长与转化。5.抑制脂肪酸合成诱导氧化应激引起氧化还原代谢紊乱。6.抗氧化剂NAC能保护抑制脂肪酸合成引起的细胞凋亡;Trolox、BHA以及DPI不能保护抑制FAS诱导的细胞凋亡。7.抑制脂肪酸合成破坏线粒体膜势能,释放Cytochrome C诱导凋亡。8.Bcl-2家族能维持线粒体膜的稳定性从而保护抑制脂肪酸合成诱导的细胞凋亡。结论肿瘤细胞内存在异常的脂肪酸代谢,脂肪酸合成代谢除了为快速增殖的肿瘤细胞提供营养和能量外,还应具备其他的生物学功能。结果证实,脂肪酸代谢平衡是对乳腺癌细胞的生长所必需的。同时发现脂肪酸合成抑制剂Cerulenin/Orlistat对乳腺癌细胞的杀伤机制与氧化还原状态失衡密切相关,NADPH/NADP+升高破坏了氧化还原平衡,进而影响了线粒体膜势能的改变,使其释放细胞色素C,最终导致细胞凋亡。证明了脂肪酸异常代谢对于细胞维持细胞内氧化还原状态具有极其重要的意义。
【关键词】：乳腺癌细胞 脂肪酸合酶 抑制剂 NADPH 氧化还原
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 材料和方法15-36
• 1.1 实验材料15-16
• 1.2 各实验所需试剂及试剂配制16-22
• 1.3 仪器设备22-23
• 1.4 实验方法及步骤23-36
• 1.4.1 质粒构建23-26
• 1.4.2 细胞培养26-27
• 1.4.3 慢病毒制备及感染目的细胞27-28
• 1.4.4 Western Blot28-31
• 1.4.5 TRizol法提取总RNA31-32
• 1.4.6 RT-PCR反应步骤32-33
• 1.4.7 DCFH-DA探针测定细胞内ROS水平33-34
• 1.4.8 线粒体膜势能检测方法（JC-1）及步骤34
• 1.4.9 二维克隆形成实验34-35
• 1.4.10 Soft Agrose克隆形成实验步骤35-36
• 结果36-50
• 2.1 乳腺癌细胞中脂肪酸合成酶的表达与细胞生长速度并无正相关性36-37
• 2.2 抑制脂肪酸的合成能抑制乳腺癌细胞的生长，诱导凋亡37-41
• 2.2.1 抑制剂抑制脂肪酸合成诱导乳腺癌细胞凋亡37-38
• 2.2.2 降表达FAS诱导细胞凋亡，影响乳腺癌细胞生长与转化能力38-41
• 2.3 抑制脂肪酸合成诱导氧化还原代谢紊乱41-47
• 2.3.1 抑制FAS诱导的乳腺癌细胞死亡是氧化还原平衡被破坏41-43
• 2.3.2 控制氧化还原代谢能保护抑制脂肪酸合成导致的乳腺癌细胞死亡43-47
• 2.4 抑制脂肪酸合成破坏线粒体膜势能，释放CytochromeC47-50
• 2.4.1 抑制脂肪酸合成破坏线粒体膜势能，，释放CytochromeC诱导凋亡47-48
• 2.4.2 Bcl2家族Bcl-2,Bcl-xl能保护抑制脂肪酸合成诱导的凋亡48-50
• 讨论50-52
• 结论52-54
• 参考文献54-58
• 发表论文和参加科研情况说明58-59
• 综述59-71
• 综述参考文献65-71
• 致谢71-72
• 个人简历72

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本文编号：475108