GRHL1基因在非小细胞肺癌中发挥的作用及相关机制的研究

发布时间：2017-06-26 10:09

  本文关键词：GRHL1基因在非小细胞肺癌中发挥的作用及相关机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨GRHL1(Grainy head-like 1)在非小细胞肺癌中的表达情况及其癌症相关性作用,并研究其表达下调的发生机制。方法:通过免疫组化和荧光定量PCR检测GRHL1在肺癌与癌旁肺组织中的表达是否存在差异;进而通过过表达GRHL1,采用MTT、克隆形成实验、Transwell实验和流式细胞仪凋亡检测等方法,探索GRHL1对肺癌细胞增殖、克隆形成、侵袭和凋亡的影响;再采用飞行时间质谱分析检测GRHL1基因启动子区甲基化情况来探索GRHL1基因下调的机制。结果:免疫组化的结果显示75例检测样本中,肺癌GRHL1的表达缺失,剩余25例样本肺癌表达亦明显低于癌旁肺组织。q PCR的结果也检出Ⅱ、Ⅲ期肺癌的GRHL1表达水平较癌旁肺组织下调。细胞学实验显示:GRHL1的过表达可明显增加肺癌细胞的凋亡率(P0.01),而对肺癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭无明显影响(P0.05)。飞行时间质谱分析的结果显示6株肺癌细胞系中的GRHL1启动子区发生明显的异常甲基化。结论:GRHL1基因在非小细胞肺癌中表达明显下调;GRHL1可发挥促进肺癌细胞凋亡的作用;GRHL1基因发生启动子区异常甲基化可能是其在肺癌中表达下调的机制。
【关键词】：非小细胞肺癌 GRHL1 基因甲基化 凋亡
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 中英文缩略词表7-8
• 第1章 引言8-11
• 第2章 材料与方法11-26
• 2.1 材料11-13
• 2.1.1 细胞11
• 2.1.2 慢病毒载体系统11
• 2.1.3 主要试剂11-12
• 2.1.4 主要仪器设备12-13
• 2.2 实验设计和方法步骤13-26
• 2.2.1 免疫组织化学染色法13-14
• 2.2.2 q PCR检测肺癌标本中GRHL1表达水平14-16
• 2.2.3 肺癌细胞培养16
• 2.2.4 Western-Blot16-18
• 2.2.5 肺癌细胞DNA提取18-19
• 2.2.6 甲基化检测19-22
• 2.2.7 去甲基化影响GRHL1表达22-23
• 2.2.8 构建重组慢病毒23
• 2.2.9 MTT检测肺癌细胞增殖情况23-24
• 2.2.10 细胞克隆实验24
• 2.2.11 Transwell实验24-25
• 2.2.12 凋亡检测25
• 2.2.13 统计学处理25-26
• 第3章 结果26-36
• 3.1 GRHL1在肺癌与癌旁的表达差异及肺癌细胞系中的表达情况26-30
• 3.1.1 免疫组化显示GRHL1在肺癌中的表达明显较癌旁正常肺组织低26-28
• 3.1.2 临床分期较高的NSCLC癌组织中GRHL1表达明显下调28-29
• 3.1.3 不同肺癌细胞系中的表达情况29-30
• 3.2 GRHL1过表达对细胞克隆增殖、侵袭、凋亡的影响30-34
• 3.2.1 稳定细胞系鉴定30-31
• 3.2.2 MTT实验31
• 3.2.3 细胞克隆形成实验31-32
• 3.2.4 Transwell实验32-33
• 3.2.5 细胞凋亡实验33-34
• 3.3 肺癌细胞GRHL1基因启动子区序列异常甲基化可致使其表达下调34-36
• 3.3.1 GRHL1基因在肺癌细胞系中检测到明显的超甲基化34-35
• 3.3.2 5-Aza处理后GRHL1基因表达情况35-36
• 第4章 讨论36-39
• 第5章 结论与展望39-40
• 5.1 结论39
• 5.2 展望39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-52
• 参考文献48-52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：485733