SOS1对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制探究

发布时间：2017-07-03 16:34

  本文关键词：SOS1对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制探究

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【摘要】：目的：探讨SOSl对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制。方法：1.体外实验：免疫荧光检测SOS1表达缺失的Hey细胞(Hey-SOSli)、转染阴性对照细胞(Hey-NT)及空白对照细胞(Hey-WT)三组细胞形态、骨架蛋白、细胞伪足及细胞间排列情况；Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力；粘附实验检测细胞与基质间粘附；内渗及外渗实验反应侵袭能力;MTT和平板克隆检测细胞生长,同时检测细胞周期和凋亡。2.体内实验：构建裸鼠皮下移植瘤模型及腹腔种植转移模型,体内验证生长及转移情况。3.机制探究：1定量PCR检测E钙黏蛋白、N钙黏蛋白、波形蛋白、MMP9、MMP2、snail/twist、 Slug的RNA表达；2.Western Blot检测上述蛋白及调控EMT的信号通路中关键蛋白表达；3.免疫荧光检测snail的细胞核定位。结果：1.与Hey-NT/Hey-WT细胞相比,Hey-SOSli细胞失去极性,骨架蛋白稀疏、排列较紊乱,细胞突出的伪足减少而细胞之间排列紧密；迁移(90.00±2.45 vs.274.67±8.18 vs.254.00±2.16,P0.01)、侵袭细胞数减少(24.00±1.25 vs.11.33±2.54 vs.102.00±8.94, P0.01);细胞基质粘附能力下降(0.31±0.10 vs.0.72±0.10 vs.0.69±0.13,P＜0.05);血管内渗细胞数(13.000=1.63 vs.27.33±1.24 vs.24.00±2.16, P＜005)及外渗细胞数(9.00±2.16 vs.27.22±1.69 vs.32.33±1.05, P0.05)显著减少,细胞增殖能力及克隆形成率下降(013±0.10 vs.0.36±0.02 vs.0.41±0.06, P0 .05);细胞增殖指数下降(0.36±0.01 vs.0.49±0.01 vs.0.51±0.05, P＜0.05);总的凋亡细胞数较少, 凋亡细胞比例(3.52%±0.05%vs.5.64%±2.37% vs.3.11%±0.55%, P＞005),及尾部面积(45.86±12.81vs.47.24±10.48vs.43.58±14.01, P0.05)无显著差异。应用肿瘤细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,种植35天后,Hey-SOSli移植瘤体积和质量(0.744±0.16cm3,0.73±-0.20 g),均显著低于Hey-NT组体积和质量(2.18±1.46cm3,2.31±±0.98g)(P0.05)。在腹腔种植模型中,腹腔注射肿瘤细胞5周后,Hey-SOSli细胞在腹腔总的的转移种植病灶数明显下降(83.33±±17.06 vs.49.33±±5.65,P0.05),主要表现为肠道及其系膜(58.67±±10.53 vs.33.0±±4.32,P0.05)和横膈(16.67±±3.21 vs.10.33±±0.58,P0.05)转移灶减少。与Hey-NT、Hey-WT细胞相比,Hey-SOSli细胞上皮标志物E钙黏蛋白基因和蛋白表达明显增加,间皮标志物N钙黏蛋白、波形蛋白、MMP2、MMP9、snail基因和蛋白表达均明显减少,核内snail的量减少而胞质内表达相对增加,同时磷酸化的NF-kB下降而NFKBIA表达上调。结论：在高转移潜能卵巢癌Hey细胞中,SOS1可能通过Ras/AKT/NF-KB信号通路或非催化活性依赖的方式影响Snail转录活性而调控EMT过程,进而调节高转移潜能上皮性卵巢癌(EOC)细胞增值和侵袭。
【关键词】：卵巢癌 转移 SOS1 EMT NF-KB
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 第一部分 SOS1对卵巢癌Hey细胞增殖、粘附及侵袭的影响14-30
• 1 材料和方法14-19
• 2 结果19-27
• 3 讨论27-28
• 4 结论28-30
• 第二部分 SOS1对Hey细胞裸鼠皮下移植瘤生长及腹腔内种植转移的影响30-38
• 1 材料和方法30-33
• 2 结果33-37
• 3 讨论37
• 4 结论37-38
• 第三部分 SOS1对高转移潜能Hey细胞EMT过程的影响和机制探究38-48
• 1 材料和方法38-41
• 2 结果41-45
• 3 讨论45-46
• 4 结论46-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-53
• 文献综述：NF-kB与上皮间质转化研究进展53-69
• 参考文献59-69
• 致谢69-70
• 在校期间发表的论文和参与的科研项目70

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