miR-98对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

发布时间：2017-07-04 10:25

  本文关键词：miR-98对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

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【摘要】：背景:原发性肝细胞癌(hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界范围内常见的消化系统恶性肿瘤之一,在我国尤为高发,目前手术切除仍是主要的治疗手段,但手术切除风险高、有效率低,且肝癌对放疗不敏感,全身化疗总体有效率也不足10%,因此,发现新的诊断标志物和治疗靶点已经成为探索肝癌治疗和预后的关键。多项研究均证实了微小RNA(micro RNA,mi RNAs)的异常表达与原发性肝癌的发生发展密切相关,可见深入研究mi RNAs在HCC中的功能及相关作用机制可能在一定程度上为HCC的治疗提供新的思路。本课题组在前期研究中应用mi RNAs芯片技术对Hep G2细胞进行mi RNAs表达谱分析,结果表明,与正常肝脏细胞相比,Hep G2细胞中mi R-98的表达水平显著下调。本研究在此基础上,通过转染改变Hep G2细胞中mi R-98的表达水平,观察mi R-98对肝癌Hep G2细胞生物学行为的影响,初步探讨mi R-98在肝癌的发生发展中发挥的作用,为寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础。目的:研究mi R-98对肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法:1.将Lipofectamine 3000与mi R-98 mimics按照不同的比例进行转染,转染24 h后,运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测定转染效率。2.应用Lipofectamine 3000将mi R-98 mimics,mi R-98 inhibitor转染入Hep G2细胞中。转染24 h后,运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测定转染效率。3.MTT法检测mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC对Hep G2细胞增殖的影响。4.应用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC对Hep G2细胞凋亡的影响。5.应用Transwell小室迁移实验检测mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC对Hep G2细胞迁移能力的影响。6.应用Transwell小室侵袭实验检测mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC对Hep G2细胞侵袭能力的影响。7.应用Western blot法观察转染mi R-98 mimics,mimics-NC,mi R-98 inhibitor,inhibitor-NC后Hep G2细胞中凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。结果:1.mi RNAs mimics:Lipo3000=1:5组细胞内mi R-98的表达水平上调幅度最大,是对照组的33.36573倍。2.q RT-PCR结果显示,转染24 h后,mi R-98 mimics组细胞内mi R-98的表达量约为空白对照组的(34.81±4.80)倍,而mi R-98 inhibitor组细胞内mi R-98的表达量约为空白对照组的(0.33±0.03)倍。3.MTT结果显示,mi R-98 mimics组细胞存活率低于空白对照组及mimics-NC组(P0.05);而mi R-98 inhibitor组细胞存活率则高于空白对照组、inhibitor-NC组(P0.05)。4.流式细胞术结果显示,mi R-98 mimics组细胞凋亡率显著高于空白对照组、mimics-NC组(P0.05);mi R-98 inhibitor组细胞凋亡率则低于空白对照组以及inhibitor-NC组(P0.05)。5.Transwell小室迁移实验结果表明,mi R-98 mimics组的Hep G2细胞穿入到下层小室的数目少于空白对照组、mimics-NC组(P0.05),而mi R-98 inhibitor穿入到下层小室的Hep G2细胞数目明显多于空白对照组以及inhibitor-NC组(P0.05)。6.Transwell小室侵袭实验显示,mi R-98 mimics组细胞进入到下层小室的数目少于空白对照组、mimics-NC组(P0.05);mi R-98 inhibitor组进入到下层小室的细胞数目明显多于空白对照组以及inhibitor-NC组(P0.05)。7.Western blot法检测显示,转染48 h后,mi R-98 mimics组Bcl-2蛋白的表达水平明显低于空白对照组、mimics-NC组(P0.05)。mi R-98 inhibitor组Bcl-2蛋白的表达水平明显高于空白对照组以及inhibitor-NC组(P0.05)。结论:1.转染mi R-98 mimics可有效上调Hep G2细胞内mi R-98的表达水平,而转染mi R-98 inhibitor则能有效下调mi R-98的表达。2.上调mi R-98的表达水平能够抑制Hep G2细胞增殖,促进细胞凋亡,减弱细胞的侵袭、迁移能力。3.下调mi R-98的表达能够相对促进Hep G2细胞增殖,减少细胞凋亡,增强细胞的侵袭、迁移能力。4.mi R-98可能通过下调Bcl-2蛋白的表达,促进肝癌Hep G2细胞凋亡。
【关键词】：miR-98 HepG2 增殖 凋亡 侵袭迁移
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 英文缩略词6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-15
• 1 前言15-18
• 2 实验材料18-20
• 2.1 细胞株18
• 2.2 实验耗材及试剂18-19
• 2.3 仪器与设备19
• 2.4 主要溶液及试剂的配制19-20
• 3 实验方法20-30
• 3.1 细胞培养20-21
• 3.2 细胞转染miRNAs minics条件优化21-24
• 3.3 细胞转染24-25
• 3.4 运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测定转染效率25
• 3.5 细胞增殖检测25-26
• 3.6 细胞凋亡检测26
• 3.7 Transwell小室迁移、侵袭实验26-28
• 3.8 Western blot法观察转染后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2 的表达28-30
• 3.9 统计学分析30
• 4 结果30-38
• 4.1 预转染minics后相对定量结果30-31
• 4.2 转染后HepG2细胞内miR-98表达水平的变化31-32
• 4.3 miR-98对肝癌HepG2细胞增殖的影响32-33
• 4.4 miR-98对肝癌HepG2细胞凋亡的影响33-35
• 4.5 Transwell小室迁移实验35-36
• 4.6 Transwell小室侵袭实验36-37
• 4.7 凋亡相关蛋白Bcl-2 的表达水平37-38
• 5 讨论38-43
• 6 结论43-44
• 7 参考文献44-49
• 8 附录49-50
• 9 致谢50-51
• 10 综述51-66
• 参考文献62-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李扩;许秋然;刘欣;刘青光;王茂德;;miR-204通过下调Bcl-2和Sirt1表达抑制肝癌细胞生长[J];细胞与分子免疫学杂志;2015年02期

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本文编号：517443