PI3KCA、PI3KCB与大肠癌耐药机制及靶向治疗的相关性研究

发布时间：2017-07-04 11:10

  本文关键词：PI3KCA、PI3KCB与大肠癌耐药机制及靶向治疗的相关性研究

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【摘要】：目的检测大肠癌组织中PIK3CA、PIK3CB与多药耐药基因MDR-1、GST-7π、LRP、 Topo II的表达,并分析与临床病理因素及大肠癌多药耐药性(muhidrug resistance,MDR)之间的相关性及其临床意义；以大肠癌耐药细胞HCT/ FU为研究对象,应用RNA干扰(RNAinterference, RNAi)技术研究PIK3CA、CB与耐药的相关性,探讨PI3KCA、PI3KCB对大肠癌靶点治疗及其化疗的协同影响作用,为判断预后及临床筛选合理有效的化疗药物提供理论依据。材料与方法收集滨州医学院附属医院病理科2005年01月至2009年01月间存档的结直肠癌蜡块共316例,所选病例均为首次发现,术前未行任何放化疗,术后均进行了联合化疗,通过回访中心和电话随访所有病例。采用免疫组织化学方法检测PIK3CA、CB基因和多药耐药蛋白在大肠癌中的表达,χ2检验分析各项指标与临床病理参数之间的相关性；运用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型分析大肠癌患者预后的影响因素。选用人结肠癌氟尿嘧啶耐药细胞株(HCT-8/FU)作为研究对象,利用携带PIK3CA shRNA、PIK3CB shRNA的慢病毒进行转染,沉默PIK3CA、PIK3CB的表达,应用Real time PCR及Western印迹法鉴定转染效率；Real time PCR及Western印迹法在mRNA和蛋白水平检测各组细胞多药耐药蛋白(MDR-1)的表达；细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖；平板克隆实验及transwell实验检测细胞生物学行为的差异。应用靶向药物吉非替尼及常规化疗药物5-FU干预各组细胞,CCK-8检测耐药细胞对吉非替尼及5-FU的敏感性。结果316例大肠癌中,PIK3CA、PIK3CB的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移成正相关,其相关系数分别为0.136、0.168。MDR基因在大肠癌组织中的阳性表达率分别为：MDR-1为72.78%(230/316)、LRP为70.89%(224/316)、TopoⅡ为77.53%(45/316)GST-π为76.58%(242/316)。经Spearman相关性分析,PIK3CA、PIK3CB的表达与多药耐药蛋白MDR-1、LRP、GST-π的表达均成正相关,相关系数分别为0.288、0.128、0.197。316例大肠癌病例的中位生存期为60个月,五年生存率为47.5%, Kaplan-Meier分析结果显示,PIK3CA与PIK3CB同时高表达、淋巴结转移、MDR-1阳性、GST-π阳性患者术后5年生存率明显降低。Cox比例风险模型显示,PIK3CA (+) PIK3CB (+)、淋巴结转移、MDR-1、GST-π是影响大肠癌患者预后的独立影响因素。耐药细胞沉默PIK3CA、PIK3CB后,MDR-1表达明显降低(P0.05)；耐药细胞的增殖明显降低；transwell实验显示,沉默PIK3CA、PIK3CB,耐药细胞侵袭能力较空白组明显降低(P0.05)；平板克隆实验结果显示,沉默PIK3CA. PIK3CB,肿瘤细胞的克隆能力明显降低(P0.05),CCK-8药物敏感实验发现,大肠癌细胞敲除突变的PIK3CA、PIK3CB基因后,肿瘤细胞对吉非替尼、5-FU的耐药能力均明显减弱。结论1、PIK3CA、PIK3CB、淋巴结转移、MDR-1、GST-π是影响大肠癌患者预后的独立因素,检测PIK3CA、PIK3CB对临床合理地选择化疗药物、初步判断预后具有重要意义。2、PIK3CA、PIK3CB在大肠癌组织中表达升高,且与大肠癌的多药耐药密切相关。3、沉默大肠癌耐药细胞中的PIK3CA、PIK3CB,其增殖明显降低、凋亡明显增多,并可抑制其侵袭和克隆能力,PIK3CA、PIK3CB可能成为抑制肿瘤的新靶点。4、沉默PIK3CA、PIK3CB可提高大肠癌耐药细胞株对吉非替尼及5-FU的敏感性,减少药物浓度,达到最好治疗效果,推测PIK3CA、PIK3CB可成为逆转大肠癌耐药和靶向治疗的新靶点。
【关键词】：大肠癌 PIK3CA PIK3CB 多药耐药 预后 靶向治疗
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩略词表9-11
• 引言11-13
• 第一部分：大肠癌组织中PIK3CA、CB的表达与多药耐药性的相关性及意义13-26
• 材料与方法13-17
• 结果17-19
• 讨论19-22
• 附图22-24
• 参考文献24-26
• 第二部分：PIK3CA、CB与大肠癌耐药机制及靶向治疗的相关性研究26-49
• 材料与方法26-35
• 结果35-39
• 讨论39-42
• 附图42-47
• 参考文献47-49
• 结论49
• 本研究创新性自我评价49-50
• 综述50-59
• 参考文献55-59
• 在读期间发表文章59-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：517530