MiR-346对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其可能机制的探讨

发布时间：2017-07-07 23:01

  本文关键词：MiR-346对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其可能机制的探讨

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【摘要】：目的:控制前列腺癌细胞中miR-346的表达,研究促进及抑制miR-346的表达对去势抵抗型人前列腺癌DU-145、PC-3细胞运动、迁移及侵袭能力的影响,初步探讨干扰miR-346表达对前列腺癌细胞上皮及间质标记物表达变化的影响并探讨其可能的作用机制。方法:以去势抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3细胞株为研究对象,分别转染人工合成的miR-346的模拟物(miR-346 mimics)及反义体(inhibitor miR-346),在细胞中过表达或沉默miR-346,划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验研究改变miR-346表达后DU145、PC-3细胞运动、迁移及侵袭能力的改变,并使用Western blot法在上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)阳性的DU-145细胞中检测miR-346表达改变后上皮标志物E-cadherin以及间质标记物N-cadherin的蛋白表达变化。mi R-346可以调控TGFβ/smad信号通路里SMAD3、SMAD4的表达,采取Q-PCR法及Western blot法分别在mRNA及蛋白水平检测SMAD3、SMAD4在过表达或沉默mi R-346后的表达变化。结果:划痕实验结果显示:miR-346 mimics组细胞运动能力明显增强,inhibitor mi R-346组细胞运动能力显著降低。细胞迁移实验结果显示:DU145细胞NC组从上室迁移过膜的细胞数为57±5.7个,miR-346 mimics组192±18.5个,inhibitor NC组53±4.3个,inhibitor miR-346组16±1.3个;PC-3细胞NC组从上室迁移过膜的细胞数为29±2.7个,miR-346 mimics组90±8.5个,inhibitor NC组34±3.0个,inhibitor mi R-346组12±0.9个。在DU145和PC-3细胞中miR-346 mimics组与NC组相比,细胞迁移能力明显增强,inhibitor mi R-346组与inhibitor NC相比,细胞迁移能力显著减弱,实验组与对照组之间的差别有统计学意义(P0.05)。细胞侵袭实验显示:DU145细胞NC组从上室侵袭过膜的细胞数为38±3.7个,miR-346 mimics组98±8.5个,inhibitor NC组37±3.3个,inhibitor mi R-346组7±0.5个;PC-3细胞NC组从上室侵袭过膜的细胞数为33±2.8个,miR-346 mimics组90±8.2个,inhibitor NC组35±3.1个,inhibitor miR-346组2±0.1个。在DU145和PC-3细胞中miR-346 mimics组与NC组相比,细胞侵袭能力明显增强,inhibitor miR-346组与inhibitor NC相比,细胞侵袭能力显著减弱,实验组与对照组之间的差别有统计学意义(P0.05)。对EMT阳性的DU145细胞株进一步研究,Western blot结果显示,miR-346 mimics组上皮标志物E-cadherin的蛋白表达降低;间质标记物N-cadherin的蛋白表达升高,inhibitor miR-346组上皮标志物E-cadherin的蛋白表达增高;间质标记物N-cadherin的蛋白表达降低。对两种细胞进一步研究,Q-PCR和Western blot结果显示miR-346mimics组SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表达降低,inhibitor miR-346组SMAD3、SMAD4的mRNA及蛋白表达升高。结论:去势抵抗型人前列腺癌DU145、PC-3细胞的运动、迁移及侵袭的能力与细胞中miR-346表达水平高度相关;上皮标记物E-cadherin的蛋白表达与miR-346的表达呈负相关,间质标记物N-cadherin的蛋白表达与miR-346的表达呈正相关,即mi R-346促进前列腺癌细胞上皮间质转化,进而促进前列腺癌细胞的迁移及侵袭能力;mi R-346抑制smad3及smad4的表达,可能借此调控TGFβ/smad信号通路,影响前列腺癌细胞EMT的发生,进而促进前列腺癌的发展。
【关键词】：miR-346 前列腺癌 TGFβ/smad信号通路 转移 迁移 上皮间质转化
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-13
• 参考文献10-13
• 第一部分 miR-346对前列腺癌转移侵袭及上皮间质转化的影响13-29
• 1.材料与方法13-21
• 2.实验结果21-24
• 3.讨论24-25
• 4.结论25-26
• 参考文献26-29
• 第二部分 miR-346靶向作用与SMAD3、SMAD4基因并调控其表达29-38
• 1.材料与方法29-31
• 2.实验结果31-33
• 3.讨论33-34
• 4.结论34-35
• 参考文献35-38
• 全文小结38-39
• 综述39-48
• 参考文献43-48
• 中英文对照缩略词表48-49
• 攻读学位期间公开发表的论文49-50
• 致谢50-51

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本文编号：532112