四氢吲唑酮取代的苯甲酰胺化合物W-H4体外抗急性髓性白血病作用及机制研究

发布时间：2017-07-08 13:01

  本文关键词：四氢吲唑酮取代的苯甲酰胺化合物W-H4体外抗急性髓性白血病作用及机制研究

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【摘要】：四氢吲唑酮取代的苯甲酰胺化合物SNX-2112是Hsp90抑制剂。为了提高其抗肿瘤的活性,前期我们合成了一系列四氢吲唑酮取代的苯甲酰胺化合物,然后通过一系列肿瘤细胞模型筛选出具有较好体外抗肿瘤活性的化合物W-H4。我们研究了苯甲酰胺化合物W-H4体外抗急性髓性白血病的作用及其机制,为W-H4治疗急性髓性白血病提供了理论依据。首先我们通过一系列肿瘤细胞模型筛选出具有良好抗肿瘤作用的化合物W-H4;然后选取两株急性髓性白血病细胞HL60和KG-1a作为研究对象,通过CCK8的方法检测了W-H4对两株细胞的IC50值;通过流式细胞术检测了W-H4引起HL60和KG-1a细胞凋亡以及周期阻滞的情况;通过JC-1探针检测了W-H4引起的HL60和KG-1a细胞线粒体膜电位的变化;通过Westen Blot检测了W-H4对凋亡相关蛋白、周期相关蛋白、Hsp90客户蛋白以及自噬相关通路的影响。结果发现W-H4能够明显地抑制急性髓性白血病细胞的增殖,W-H4作用HL60和KG-1a两株细胞48h的IC50值分别为0.48μM和0.38μM,并且能够呈浓度依赖性地抑制HL60和KG-1a两株细胞的生长;W-H4能够下调HL60和KG-1a细胞中Hsp90客户蛋白的表达水平;W-H4能浓度依赖性地诱导细胞凋亡,并且引起Caspase3、8、9以及PARP的切割活化;W-H4能使HL60和KG-1a细胞线粒体膜电位下降,并使抗凋亡蛋白bcl-2的表达水平降低;W-H4能将两株细胞阻滞在G1期,影响细胞中相关周期蛋白的表达水平;并且W-H4还能诱导两株细胞发生自噬,并且抑制AKT/mTOR信号通路。综上所述,W-H4能抑制急性髓性白血病细胞的增殖,通过多种途径诱导细胞死亡,在体外表现出很强的抗急性髓性白血病活性。
【关键词】：苯甲酰胺化合物 细胞凋亡 细胞周期 细胞自噬
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 缩写词及中英文对照5-8
• 第一章 绪论8-16
• 1.1 急性髓性白血病研究进展概述8-9
• 1.2 热休克蛋白 909-15
• 1.2.1 Hsp90概述9
• 1.2.2 Hsp90的分类及结构9-10
• 1.2.3 Hsp90的生物学功能10-11
• 1.2.4 Hsp90与肿瘤的关系11-12
• 1.2.5 Hsp90抑制剂的研究进展12-15
• 1.3 本论文的研究意义15-16
• 第二章 实验材料和仪器设备16-24
• 2.1 实验材料16-19
• 2.2 细胞株来源19
• 2.3 常用试剂配制19-22
• 2.3.1 细胞体外培养相关试剂19-20
• 2.3.2 苯甲酰胺化合物母液20
• 2.3.3 Western blot相关试剂20-22
• 2.4 仪器设备22-24
• 第三章 实验方法与步骤24-29
• 3.1 细胞培养24
• 3.2 CCK8实验24
• 3.3 Annexin V /P I联合染色检测细胞凋亡24-25
• 3.4 PI单染法测定细胞周期25
• 3.5 JC-1 染色检测线粒体膜电位25-26
• 3.6 Western Blot检测26-28
• 3.6.1 细胞蛋白的提取和浓度测定26
• 3.6.2 蛋白样品的检测26-28
• 3.7 统计学处理28-29
• 第四章 实验结果29-42
• 4.1 四氢吲唑酮取代的苯甲酰胺化合物抑制肿瘤细胞增殖的活性29-31
• 4.2 W-H4对急性髓性白血病细胞HL60、KG-1a体外增殖的影响31-32
• 4.3 比较W-H4、17-AAG对急性髓性白血病细胞株HL60、KG-1a体外增殖的影响32-33
• 4.4 W-H4对HL60、KG-1a细胞中Hsp90客户蛋白的影响33-34
• 4.5 W-H4诱导急性髓性白血病细胞株HL60、KG-1a细胞发生凋亡34-35
• 4.6 W-H4诱导HL60、KG-1a细胞caspase家族以及PARP的活化35-36
• 4.7 W-H4对Bcl-2 家族蛋白的影响36
• 4.8 W-H4诱导HL60、KG-1a细胞发生线粒体损伤36-37
• 4.9 W-H4诱导HL60、KG-1a细胞发生周期阻滞37-38
• 4.10 W-H4对HL60、KG-1a细胞周期蛋白的影响38-40
• 4.11 W-H4诱导急性髓性白血病细胞株HL60、KG-1a细胞中LC3-II的积累40-41
• 4.12 W-H4对自噬调控信号通路的影响41-42
• 第五章 讨论与总结42-45
• 5.1 讨论42-44
• 5.2 总结与展望44-45
• 参考文献45-50
• 硕士期间已发表的论文和申请的专利50-51
• 致谢51

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