胃癌细胞EMT标志物表达与其侵袭VM形成及化疗敏感性的体外研究

发布时间：2017-07-08 18:05

  本文关键词：胃癌细胞EMT标志物表达与其侵袭VM形成及化疗敏感性的体外研究

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【摘要】：目的:本实验第一部分通过划痕、Transwell初步了解三株胃癌细胞系MGC803、BGC823、SGC7901的迁移侵袭力,基于此探讨验证EMT、VM与胃癌侵袭力的关系及二者之间是否存在关联性;第二部分探讨验证EMT、VM与胃癌化疗敏感性的关联。方法:1、划出指定区域,12h后观察三组胃癌细胞迁入指定区域的数量,了解三组胃癌细胞的迁移力差异性。2、取浓度为2×105/ml各细胞悬液30ul加入transwell上室孔,40h通过DAPI染色计数透膜细胞数,了解三组胃癌细胞的侵袭力差异性。3、Western-blot检测MGC803、BGC823、SGC7901的EMT标志物(E-cadherin、Vimentin)表达差异,据此评估三组胃癌细胞EMT差异性。4、将浓度为5×105/ml各细胞悬液1ml接种于300ul Matrigel胶行三维培养,12h观察有无VM管道形成,后随机选取5个显微镜视野计算VM个数,了解三组胃癌细胞VM形成有无差异性,综合本实验结果及上述划痕、Transwell、Western-blot实验结果,探讨验证EMT、VM与胃癌侵袭力关系及二者之间有无关联性。5、取1000个各胃癌细胞,用1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml多西他赛体外处理24h,经CCK-8方法测定OD,了解各胃癌细胞系化疗差异性,以期探讨EMT、VM与胃癌抗化疗关联性。结果:1、划痕实验示MGC803、BGC823、SGC7901迁移力依次下降。2、三组胃癌细胞透膜个数依次为:MGC803(72.25±2.75),BGC823(44.25±2.50),SGC7901(22.50±2.08),两两比较,差异具有统计学意义(P0.05),即MGC803、BGC823、SGC7901侵袭力依次下降。3、MGC803:E-cadherin无表达,Vimentin表达最高;SGC7901:E-cadherin表达最高,Vimentin表达最低。MCG803、BGC823、SGC7901的EMT程度依次降低。4、MGC803、BGC823、SGC7901均能形成VM管道,且三组胃癌细胞VM管道数依次为:MGC803(114.20±8.67)、BGC823(102.40±8.41)、SGC7901(91.00±6.82),两两比较,差异具有统计学意义(P0.05),即MGC803、BGC823、SGC7901的VM形成力依次下降。5、多西他赛体外处理24h后各胃癌细胞的OD值依次为MGC803:1ug/ml(0.714±0.005)、5ug/ml(0.464±0.008)、10ug/ml(0.352±0.009);BGC823:1ug/ml(0.652±0.009)、5ug/ml(0.432±0.007)、10ug/ml(0.326±0.003);SGC7901:1ug/ml(0.503±0.010)、5ug/ml(0.312±0.005)、10ug/ml(0.226±0.003)。各胃癌细胞组内OD值与多西他赛量呈量-效关系;同一浓度化疗下MGC803、BGC823、SGC7901敏感性依次升高,各胃癌细胞间化疗敏感差异性具有统计学意义(P0.05)。结论:1、MGC803、BGC823、SGC7901的迁移侵袭依次下降,EMT、VM与胃瘤的侵袭成正相关性,且EMT程度高的胃癌细胞易于形成VM。2、EMT的发生、VM的形成弱化了胃癌的化疗敏感性。
【关键词】：上皮间质化 血管生成拟态 三维培养 迁移
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 流程图13-14
• 一、胃癌细胞系EMT标志物与其侵袭、VM形成体外研究14-42
• 1.1 对象和方法14-27
• 1.1.1 研究对象14
• 1.1.2 主要仪器设备14-15
• 1.1.3 主要试剂15-16
• 1.1.4 主要试剂溶液的配制16-18
• 1.1.5 实验方法18-26
• 1.1.6 结果判断26-27
• 1.1.7 统计学分析27
• 1.2 结果27-37
• 1.2.1 MGC803、BGC8、SGC7901细胞形态27-28
• 1.2.2 MGC803、BGC823、SGC7901划痕迁入结果28-29
• 1.2.3 MGC803、BGC823、SGC7901 Transwell实验结果29-31
• 1.2.4 MGC803、BGC823、SGC790所需上样量31-32
• 1.2.5 Western-blot检测MGC803、BGC823、SGC7901三胃癌细胞E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平32
• 1.2.6 MGC803、BGC823、SGC7901三维培养结果32-37
• 1.3 讨论37-40
• 1.4 小结40-42
• 二、三组胃癌细胞系对多西他赛化疗差异性42-48
• 2.1 对象和方法42-44
• 2.1.1 研究对象42
• 2.1.2 主要仪器设备42
• 2.1.3 主要试剂42-43
• 2.1.4 主要的试剂溶液的配制43
• 2.1.5 实验方法43-44
• 2.1.6 统计学分析44
• 2.2 结果44-46
• 2.2.1 CCK-8 测定 10ug/ml、5ug/ml、1ug/ml多西他赛（DOC）对MGC803、BGC823、SGC7901体外处理后OD值44-46
• 2.3 讨论46-47
• 2.4 小结47-48
• 结论48-50
• 参考文献50-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-56
• 综述 上皮间质化、血管生成拟态与肿瘤的研究进展56-75
• 综述参考文献66-75
• 致谢75-76
• 个人简历76

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