YAP1和β-catenin在人大肠癌组织中的表达及siRNA沉默YAP1基因对大肠癌RKO细胞系生物学特性的影响

发布时间：2017-07-13 16:05

  本文关键词：YAP1和β-catenin在人大肠癌组织中的表达及siRNA沉默YAP1基因对大肠癌RKO细胞系生物学特性的影响

  更多相关文章： 大肠癌 YAP1 β-catenin 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 siRNA

【摘要】：目的：(1)检测YES相关蛋白1(YAP1)、β-链接素(β-catenin)在人大肠癌(CRC)组织中的表达及其与临床病理因素间的关系。(2)观察siRNA干扰YAP1基因对大肠癌细胞系RKO生物学特性的影响。方法：(1)应用免疫组织化学Envision二步法检测99例人大肠癌组织及30例正常肠黏膜组织中YAP1和β-catenin的表达状况,分析其与大肠癌临床病理参数之间的关系及它们之间的相互关系。(2)以脂质体lip-2000为载体,用针对YAP1特异靶点的siRNA转染RKO人大肠癌细胞系后,应用RT-PCR检测YAP1mRNA表达变化,Western Blot检测YAP1蛋白表达变化,CCK8实验检测对细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果：(1)YAP1蛋白在大肠癌组织中的阳性表达率为56.57%(56/99),显著高于大肠正常黏膜组织16.67%(5/30)(p0.01)；β-catenin蛋白在大肠癌组织中的异位(细胞质/核)表达率为51.52%(51/99),明显高于大肠正常黏膜组织0%(0/30)(p0.01)。(2)YAP1蛋白的表达水平与患者性别,年龄,淋巴结转移,浸润深度,肿瘤的分化程度及临床Duke's分期均无关；β-catenin蛋白的细胞核表达水平与大肠癌的浸润深度及分化程度相关(p0.05),与其它临床病理因素无关(p0.05)；β-catenin蛋白的细胞质表达水平与大肠癌的分化程度相关(p0.05),与其它临床病理因素无关(p0.05); β-catenin蛋白的细胞膜表达水平与临床病理因素均无关(p0.05)。(3)β-catenin蛋白细胞质、细胞核的表达与YAP1细胞核、细胞质/核的表达呈正相关(p0.05)；β-catenin蛋白细胞核表达与YAP1细胞质的表达呈正相关(p0.05)。(4)YAP 1-siRNA转染RKO细胞后,RT-PCR结果显示转染组条带亮度明显低于阴性对照组,转染组RKO细胞中YAP1 mRNA的表达量受到明显抑制。Western Blot结果显示转染组条带亮度明显低于阴性对照组,YAP1转染组中YAP1蛋白表达量较阴性对照组明显下降。(5)CCK8实验结果：与阴性对照组相比,YAP1-siRNA组细胞的生长出现明显抑制(p0.05)。(6)流式细胞技术检测结果：与阴性对照组相比,YAP1-siRNA组的凋亡率显著增高,两者比较差异有显著性(p0.05)。结论：YAP1和β-catenin在大肠癌的发生发展中均具有重要作用。同时两者具有协同作用,提示联合检测较单一检测更有意义。siRNA干扰YAP1基因能有效抑制人大肠癌细胞系YAP1 mRNA及蛋白表达,细胞增殖能力减弱,并促进细胞凋亡。提示以YAP1基因为靶点,利用siRNA技术进行基因治疗有可能成为一种新的治疗手段。
【关键词】：大肠癌 YAP1 β-catenin 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 siRNA
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 1 前言11-13
• 2 材料与方法13-26
• 3 实验结果26-34
• 4 讨论34-39
• 5 结论39-40
• 参考文献40-46
• 附录46-47
• 致谢47-48
• 综述48-58
• 参考文献54-58

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本文编号：537509