2-甲氧基雌二醇对鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、迁移及放疗抵抗性的影响及机制

发布时间：2017-07-13 16:28

  本文关键词：2-甲氧基雌二醇对鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、迁移及放疗抵抗性的影响及机制

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【摘要】：背景及目的:肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)理论表明,肿瘤放疗抵抗的根源在于其干细胞的存在,然而其机制还不够清晰。2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME2)是雌激素在体内的代谢产物。最近研究发现2-ME2能通过调节转录因子活性(包括NF-κB/HIF-1),介导多种肿瘤的凋亡与化疗的抵抗,因而目前正作为一种抗肿瘤药物被研究。本研究的目的是明确2-ME2对鼻咽癌CNE-2干细胞(nasopharyngeal carcinoma CNE-2 stem cells,NPCSC)增殖、迁移与放疗抵抗的影响及其机制,对降低鼻咽癌干细胞的放疗抵抗,进而提高鼻咽癌的治愈率具有重要意义。方法:1 NPCSC模型建立利用无血清悬浮系统富集获得鼻咽癌CNE-2干细胞,并通过再分化、软琼脂克隆、Transwell小室实验和FCM法检测富集获得的CNE-2干细胞分化、自我更新、迁移及CD133+细胞比例的变化。RT-PCR法检测NPCSC中干细胞表面标志物Bmi-1、Twist1和Oct4 mRNA的表达。克隆形成实验检测NPCSC对放疗的抵抗性。22-ME2对NPCSC增殖、迁移及放疗抵抗性的影响及机制探讨采用不同浓度的2-ME2(0、4和8μmol/L)处理CNE-2干细胞,再联合X射线(0/2/4/8GY)照射,CCK-8及Transwell检测干细胞增殖及迁移能力的变化,克隆形成实验检测NPCSC放疗抵抗性的改变;FCM及蛋白质印迹法检测不同浓度2-ME2处理后干细胞CD133+细胞比例变化及HIF-1α、NF-κB p65和上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物蛋白的表达。3 NF-κB p65对2-ME2抗癌效应的影响及机制利用慢病毒转染技术沉默NF-κB p65基因,联合X射线照射,探讨NF-κB p65对2-ME2抗癌效应的影响。结果:1该方法获得的干样细胞具有较强的自我更新及分化能力,相对于亲本CNE-2细胞具有更强的克隆(p0.01)及迁移(p0.01)能力、更高的CD133+细胞比例(p0.01)及干性基因比例(p0.05),说明该细胞具有较强干性。同时克隆形成实验显示干样细胞对放疗具有较强的抵抗性。我们将此细胞作为NPCSC用于后续实验。2 2-ME2(0/4/8μmol/L)处理NPCSC后,随浓度增加,NPCSC增殖活力降低,迁移能力降低,对放疗抵抗性降低,同时CD133+细胞比例降低,HIF-1α、NF-κB p65蛋白表达降低,EMT标志物E-cad增加、N-cad及Vimentin降低。3沉默NF-κB p65后,随2-ME2浓度增加,鼻咽癌干细胞的增殖、迁移及放疗敏感性沉默组比对照组下降更加明显。结论:2-甲氧基雌二醇抑制鼻咽癌CNE-2干细胞的增殖及迁移能力并降低其放疗抵抗,其机制可能为2-甲氧基雌二醇抑制HIF-1/NF-κB信号通路并逆转细胞EMT。
【关键词】：2-甲氧基雌二醇 鼻咽癌 肿瘤干细胞 NF-κB HIF-1
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 第一节 鼻咽癌CNE-2 干细胞模型的建立10-15
• 前言10
• 1 方法10-13
• 2 结果13-14
• 3 讨论14-15
• 第二节 2-甲氧基雌二醇对鼻咽癌干细胞增殖、迁移及放疗抵抗性的影响及机制探讨15-20
• 前言15
• 1 材料与方法15-17
• 2 结果17-18
• 3 讨论18-20
• 第三节 NF-κB p65对 2-甲氧基雌二醇抗癌效应的影响及机制20-24
• 前言20
• 1 方法20-22
• 2 结果22-23
• 3 讨论23-24
• 全文总结24-25
• 附图25-29
• 参考文献29-33
• 文献综述33-35
• 致谢35-36
• 攻读学位期间发表的论文36

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本文编号：537643