Bmi-1促进乳腺癌侵袭迁移分子机制研究
本文关键词：Bmi-1促进乳腺癌侵袭迁移分子机制研究
【摘要】：背景：乳腺癌是一种常见的严重危害女性身心健康的恶性肿瘤。最近统计数据显示,全球每年约有120万妇女被检查出患有乳腺癌,其中每年大约有50万女人患者死于乳腺癌。在北美、西欧等发达国家,女性恶性肿瘤中乳腺癌的发病率居首位。而在发展中国家,特别是中国每年的发病率更是呈上升趋势,并有年轻化趋势。现在对乳腺癌的治疗,主要结合手术、化疗及放疗等治疗手段,虽然有了很大的进步,但乳腺癌预后仍较差,且对复发转移的乳腺癌治疗效果十分有限。Bmi-1基因是1991年在鼠淋巴细胞中发现的多梳基因(polycomb group genes, PcG)家族的重要成员之一。Bmi-1广泛表达于多种肿瘤中并与肿瘤的发生发展密切相关,已有研究表明Bmi-1在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌患者中异常表达。在乳腺癌中Bmi-1的mRNA及蛋白水平均高表达,且Bmi-1与乳腺癌进展相关。为了进一步研究Bmi-1在乳腺癌侵袭迁移中发挥的作用,我们利用低表达Bmi-1的乳腺癌细胞株BT-474构建Bmi-1过表达的稳定细胞株,研究Bmi-1过表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响,研究结果有望为探讨乳腺癌治疗的新靶点奠定基础。目的：探讨Bmi-1在乳腺癌侵袭迁移中的作用及其分子机制研究方法：设计并化学合成了针对Bmi-1的小干扰RNA,转染恶性程度较高的乳腺癌细胞株MDA-MB-231,利用实时荧光定量PCR和Western Blot分别mRNA和蛋白水平检测Bmi-1基因的表达。体外通过Transwell小室、Matrigel胶模型,观察Bmi-1被沉默后对乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭、转移能力的影响。根据GenBank中人源Bmi-1的mRNA序列,设计引物,构建Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,将其转染乳腺癌细胞株BT474,G418筛选建立过表达Bmi-1的稳定细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot检测Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平,Matrigel和Transwell侵袭小室模型检测转染和未转染BT474细胞体外侵袭和转移能力的变化。结果：设计合成的siRNA成功转染MDA-MB-231, qRT-PCR和Western结果显示,Bmi-1-siRNA转染组Bmi-1基因表达水平被有效抑制;对照组相比,Bmi-1-siRNA转染组的细胞侵袭迁移数目明显下降,Bmi-1被沉默后促进MDA-MB-231田胞上皮标志物E-cadherin的表达,抑制了间质标志物N-cadherin和Vimentin的表达。成功构建人源Bmi-1真核表达载体GV144-Bmi-1,转染BT474细胞后,获得稳定转染细胞株。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,与空载体组相比,实验组Bmi-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P0.05)。Bmi-1过表达后,迁移能力明显增强、穿膜细胞数明显增多(P0.05)。结论：抑制Bmi-1基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞EMT的发生,进而降低了细胞的侵袭迁移的能力。过表达Bmi-1稳定细胞株构建成功,Bmi-1基因过表达可显著提高乳腺癌细胞株BT474的体外侵袭迁移能力。
【关键词】：Bmi-1 乳腺癌细胞 侵袭 迁移
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-7
- 中文摘要7-10
- 英文摘要10-13
- 前言13-16
- 第一部分 Bmi-1基因沉默对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭迁移影响16-30
- 1 材料与方法16-22
- 2 结果22-29
- 3 讨论29-30
- 第二部分 Bmi-1真核过表达载体的构建及其对乳腺癌细胞BT474的影响30-41
- 1 材料与方法30-33
- 2 结果33-39
- 3 讨论39-41
- 参考文献41-43
- 文献综述43-51
- 参考文献46-51
- 致谢51-52
- 攻读硕士学位期间发表的论文52
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