Btk及NFκB抑制剂对急淋小鼠疾病转归的影响及其作用机制的探讨

发布时间：2017-07-20 06:44

  本文关键词：Btk及NFκB抑制剂对急淋小鼠疾病转归的影响及其作用机制的探讨

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【摘要】：目的:通过观察Btk及NFκB抑制剂对急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID(BALL-NOD/SCID)模型小鼠疾病转归及生存期的影响,研究其可能的作用机制,探讨Btk及NFκB抑制剂靶向治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的可行性及临床意义。方法:1.B-ALL-NOD/SCID小鼠模型的构建:4~5周龄NOD/SCID小鼠尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞(0.2ml),无菌层流柜中饲养。观察小鼠白血病发病情况;利用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞后外周血中CD10+CD19+细胞占有核细胞的比例。2.PCI-32765、Bortezomib和Ara-c对B-ALL-NOD/SCID模型小鼠疾病转归的影响及其机制:将小鼠随机分为:空白组(未建模组)、B-ALL-NOD/SCID模型小鼠又分为:对照组(未加药组)、单药组(PCI-32765、Bortezomib、Arac)、两药联用组(PCI-32765及Bortezomib)及三药联用组(PCI-32765、Bortezomib及Ara-c),于不同时间点(3天、7天、15天)加药,无菌层流柜中饲养,观察小鼠白血病发病情况、生存期、脾脏大小、重量变化及病理形态改变。于小鼠濒死前或死亡后即行解剖,留取骨髓细胞,瑞氏染色观察有无异常的白血病细胞;脾脏常规病理切片,观察异常白血病细胞在脾脏中的浸润情况;Western Blot检测各组脾脏细胞Btk、NFκB、凋亡蛋白caspase-3、抗凋亡蛋白BCL-XL、CIAP-1表达的变化。免疫组化检测脾脏细胞Btk、NFκB蛋白的表达。结果:1.成功构建B-ALL-NOD/SCID模型小鼠:1.1 NOD/SCID小鼠移植后7天,流式细胞术检测外周血中CD10+CD19+细胞占有核细胞细胞的比例大于1%,提示小鼠生物学发病。1.2 NOD/SCID小鼠移植后15天,开始出现食欲减退,后肢瘫痪,弓背抬高等症状,提示临床发病。1.3白血病小鼠的平均生存期:(18.40±0.89)天。2.Bortezomib、PCI-32765和Ara-c对B-ALL-NOD/SCID小鼠疾病转归的影响及其机制:2.1 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞3天后,单药应用Bortezomib(1mg/kg)、PCI-32765(12.5mg/kg)、Ara-c(10mg/kg),各组小鼠生存期分别为(22.70±0.37天)、(22.30±0.52天)、(21.33±0.67天),Bortezomib和PCI-32765两药联用组生存期为(28.00±0.60天),Bortezomib、PCI-32765和Ara-c三药联用组生存期为(31.50±1.23天),与对照组小鼠生存期(18.67±0.42天)相比,生存期均显著延长(p0.05)。2.2 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞7天后,单药应用Bortezomib、PCI-32765小鼠生存期分别为(21.83±0.70天)、(21.67±0.42天),Bortezomib和PCI-32765两药联用组生存期为(24.17±0.80天),与对照组小鼠生存期(18.40±0.40天)相比,生存期均显著延长(p0.05)。2.3 NOD/SCID小鼠移植Nalm-6细胞15天后,单药应用Bortezomib、PCI-32765后B-ALL-NOD/SCID小鼠的生存期比对照组有所延长,但并无统计学差异;单用Ara-c及联用Bortezomib、PCI-32765和Ara-c生存期分别为(21.83±0.48天)、(23.67±0.71天),明显高于对照组(18.40±0.40天)及单药组(p0.05)。2.4单药及联合应用Bortezomib和PCI-32765,均可降低小鼠脾脏细胞Btk及NFΚB的表达,病理组织各组免疫组化平均累积光密度值(IOD)分别为Btk:(73890.18±1911.34、74300.38±1516.14,36039.81±2894.98)vs对照组(120348.30±9881.02),(p0.05),NFκB:(73379.62±2121.27,74184.62±2208.24,33857.30±2789.34)vs对照组(109770.90±6849.65),(p0.05).Western Blot检测示单药及联合用药组Btk、NFκB及BCL-XL、CIAP-1表达水平下降(p0.05),caspase-3表达水平升高,两药联用作用更加明显(p0.01)。结论:1.利用4~5周雌性NOD/SCID小鼠尾静脉注射5×106个Nalm-6细胞可成功建立B-ALL-NOD/SCID小鼠模型,生物学发病时间为7天,临床发病时间为15天。平均生存期为(18.40±0.89)天。该模型的构建具有简便,易行,成模率高,重复性好等特点,是一种理想的用于ALL发病机制研究及临床化疗方案筛查的动物模型。2.Bortezomib和PCI-32765均可明显延长B-ALL-NOD/SCID小鼠的生存期,两者具有协同作用,同时可缩小脾脏。其机制可能是通过抑制Btk、NFΚB的表达,从而抑制NFκB的核转录,阻止NFκB的持续激活,下调抗凋亡蛋白BCLXL、CIAP-1的表达,上调凋亡蛋白caspase-3的表达,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞的凋亡,发挥抗白血病效应。3.化疗药物Ara-c与靶向药物Bortezomib、PCI-32765联用具有协同抗白血病作用,提示临床上可联合使用化疗药物与靶向药物治疗急性淋巴细胞白血病,以增强治疗效果。
【关键词】：急性B淋巴细胞白血病(B-ALL) Btk NFκB PCI-32765 Bortezomib Ara-c B-ALL-NOD/SCID小鼠
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 引言10-13
• 第一部分 人急性B淋巴细胞白血病-NOD/SCID小鼠模型的建立13-24
• 引言13-14
• 材料与方法14-17
• 结果17-21
• 讨论21-23
• 参考文献23-24
• 第二部分Btk及NFκB抑制剂对急淋小鼠疾病转归的影响及其作用机制的探讨24-52
• 引言24-26
• 材料与方法26-36
• 结果36-46
• 讨论46-50
• 参考文献50-52
• 结论52-53
• 文献综述NOD/SCID小鼠-白血病模型在白血病研究中的应用现状及进展53-63
• 参考文献61-63
• 附录63-64
• 攻读学位期间发表文章情况64-65
• 致谢65-66

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本文编号：566696