辣椒素对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制的研究

发布时间：2017-07-20 13:01

  本文关键词：辣椒素对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响以及机制的研究

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【摘要】：乳腺癌是女性中常见的肿瘤疾病,根据研究数据发现,我国每年有新增乳腺癌患者16.9万名。乳腺癌发现及时,可以采取手术治疗的方法,能够有效的延长患者的生命。但是有相当数量的乳腺癌患者在确诊时,肿瘤细胞已经发生了转移。目前对于癌症转移的治疗效果不佳,很多肿瘤发生转移的患者往往很快被癌症夺走了生命。因此,关于抗肿瘤转移的治疗是一直以来都是研究的重点。辣椒素主要提取于红辣椒,是辣椒辣味的主要来源。有关辣椒素的应用十分广泛,从日常调味品的辣椒到警察手中的辣椒喷雾。而在临床方面,辣椒素被发现能够对炎性疼痛等有缓解效果,因此作为镇痛剂被广泛应用。目前很多研究发现,辣椒素能够抑制肿瘤的发展。在结肠癌、前列腺癌、乳腺癌等癌症组织中都有实验结果发现辣椒素能够诱导肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤的发展。但是辣椒素抗肿瘤的研究中,辣椒素能否对肿瘤细胞侵袭转移能力产生影响的研究相对较少。因此本实验从这个角度出发,去探究辣椒素对肿瘤细胞转移侵袭能力的影响。首先,我们选择高转移性的乳腺癌MDA-MB-231细胞作为实验对象,通过细胞创口愈合、细胞侵袭实验等去探究辣椒素对乳腺癌细胞转移侵袭能力的影响。实验结果表明,辣椒素能够明显抑制乳腺癌细胞侵袭转移。那么辣椒素如何影响到乳腺癌细胞的呢?我们提出假设辣椒素通过辣椒素受体发挥抗肿瘤转移的作用。为了证明这个假设,我们设计用Capsazepine阻断辣椒素受体后进行实验。但实验结果发现,辣椒素发挥抗肿瘤作用与辣椒素受体无关,因为辣椒素受体被阻断并不能逆转辣椒素对乳腺癌细胞的影响。为了继续探究辣椒素如何发挥作用,我们通过肿瘤转移PCR的方法,发现辣椒素能够调控肿瘤转移相关基因的表达,辣椒素刺激后MTSS1、KISS1、BRMS1等抑癌基因的表达上调,MMP9、MMP11等基质金属蛋白酶表达下调。为了进一步研究,我们通过实时荧光定量PCR的方法,研究转录因子AP-1的变化,AP-1是调控基质金属蛋白酶等促进肿瘤转移、增殖重要转录因子,实验结果表明辣椒素刺激后转录因子AP-1的表达降低。因此,通过这些结果,我们发现辣椒素可能通过影响AP-1等转录因子活性,调控肿瘤转移相关基因的表达,最终发挥抗肿瘤转移侵袭的作用。
【关键词】：辣椒素 乳腺癌 癌症转移
【学位授予单位】：山东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-9
• 文献综述9-17
• 1. 辣椒素9-10
• 2. 辣椒素与辣椒素受体10-11
• 3. 辣椒素与肿瘤11-14
• 4. 辣椒素抗肿瘤作用可能存在的机制14-17
• 前言17-19
• 第一章 辣椒素对乳腺癌细胞活力以及细胞周期的影响19-27
• 1. 实验材料与试剂19
• 2. 实验方法19-22
• 2.1 人乳腺癌细胞株的培养19-20
• 2.2 MTT实验20
• 2.3 细胞周期分析实验20-22
• 3. 实验结果22-26
• 3.1 辣椒素刺激对乳腺癌细胞增殖能力的影响22-24
• 3.2 辣椒素刺激对乳腺癌细胞周期的影响24-26
• 4. 本章小结26-27
• 第二章 辣椒素对人乳腺癌细胞侵袭及迁移能力的影响27-35
• 1. 实验材料与试剂27
• 2. 实验方法27-30
• 2.1 人乳腺癌细胞株的培养27
• 2.2 细胞创口愈合实验27-28
• 2.3 细胞侵袭实验28-29
• 2.4 软琼脂克隆形成实验29-30
• 3. 实验结果30-34
• 3.1 辣椒素刺激对人乳腺癌细胞迁移能力的影响30-32
• 3.2 辣椒素刺激对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响32-33
• 3.3 辣椒素刺激对人乳腺癌细胞非锚定生长能力的影响33-34
• 4. 本章小结34-35
• 第三章 辣椒素受体的研究35-41
• 1. 实验材料与试剂35
• 2. 实验方法35-36
• 2.1 人乳腺癌细胞株的培养35
• 2.2 TRPV1封闭实验35
• 2.3 MTT实验35-36
• 2.4 细胞创口愈合实验36
• 2.5 细胞侵袭实验36
• 3. 实验结果36-40
• 3.1 TRPV1被阻断后，辣椒素刺激对乳腺癌细胞增殖能力的影响36-37
• 3.2 TRPV1被阻断后，辣椒素刺激对乳腺癌细胞迁移能力的影响37-39
• 3.3 TRPV1被阻断后，辣椒素刺激对乳腺癌细胞侵袭能力的影响39-40
• 4. 本章小结40-41
• 第四章 辣椒素刺激对乳腺癌细胞转移相关基因表达的影响41-45
• 1. 实验材料与试剂41
• 2. 实验方法41-42
• 2.1 人乳腺癌细胞株的培养41
• 2.2 肿瘤转移PCR Array41-42
• 3. 实验结果42-43
• 4. 本章小结43-45
• 第五章 辣椒素刺激对乳腺癌细胞中转录因子AP-1 的影响45-49
• 1. 实验材料与试剂45
• 2. 实验方法45-47
• 2.1 人乳腺癌细胞株的培养45-46
• 2.2 cDNA的制备46
• 2.3 Real-Time PCR46-47
• 3. 实验结果47-48
• 4. 本章小结48-49
• 讨论49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-58
• 附录1 主要仪器设备58-59
• 附录2 英文缩写词59-60
• 致谢60

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本文编号：568089