Hedgehog-Gli信号通路在骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡影响中的作用及机制研究

发布时间：2017-07-20 14:19

  本文关键词：Hedgehog-Gli信号通路在骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡影响中的作用及机制研究

  更多相关文章： 白血病 髓样 急性 GANT61 Hedgehog-GLI信号通路

【摘要】：目的:探索骨髓基质细胞HS-5对急性髓系白血病细胞HL-60凋亡的影响及其可能机制,为急性髓系白血病的治疗提供理论依据。方法:(1)应用骨髓基质细胞HS-5与急性髓系白血病细胞HL-60建立体外共培养模型从而模拟体内骨髓微环境对白血病细胞凋亡的影响。应用CCK8试剂盒检测不同实验组间HL-60细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测各组HL-60细胞凋亡率;PI单染流式细胞仪检测各组HL-60细胞周期时相分布;应用扫描电镜观察共培养条件下HS-5骨髓基质细胞与HL-60急性髓系白血病细胞的位相特征;半定量RT-PCR等方法检测各实验组HL-60细胞Hedgehog信号通路组成成分GLI 1基因及凋亡基因BCL-2、BCL-XL表达情况;免疫荧光法检测HL-60细胞GLI 1蛋白表达状况。结果:(1)与HS-5细胞共培养的HL-60细胞增殖速度快,用以GLI为靶点的Hedgehog信号通路抑制剂GANT61处理共培养体系后HL-60细胞增殖速度减慢。(2)与HS-5细胞共培养的HL-60细胞凋亡率减少,用以GLI为靶点的Hedgehog信号通路抑制剂GANT61处理共培养体系后HL-60细胞凋亡率增加。(3)在共培养48h时,HL-60细胞阻滞于G0/G1期,G0/G1期的细胞比例明显增多,此种情况持续到共培养72h。(4)骨髓基质细胞HS-5与急性髓系白血病细胞HL-60共培养时,HL-60细胞与骨髓基质细胞HS-5粘附生长,共培养条件下,扫描电镜观察见到部分HL-60细胞生长入骨髓基质细胞层。(5)RT-PCR凝胶电泳结果显示,共培养体系中HL-60细胞GLI 1 m RNA表达上调,抑凋亡基因BCL-2和BCL-XL的m RNA表达上调。(6)免疫荧光法检测GLI 1蛋白表达状况:共培养体系中HL-60细胞GLI 1蛋白表达上调。结论:(1)骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞具有促进增殖作用。(2)骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞具有抑制凋亡作用。(3)骨髓基质细胞激活急性髓系白血病细胞中的Hedgehog信号通路进而上调下游靶基因BCL-2和BCL-XL。
【关键词】：白血病 髓样 急性 GANT61 Hedgehog-GLI信号通路
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文缩略表7-11
• 前言 (Introduction)11-13
• 材料与方法（Materials & Methods）13-25
• 1 实验材料13-16
• 1.1 主要仪器13
• 1.2 主要试剂13-14
• 1.3 主要试剂的配制14-15
• 1.4 实验耗材15-16
• 2 实验方法16-25
• 2.1 细胞株培养16-17
• 2.1.1 骨髓基质细胞HS-5 的换液、传代及冻存16-17
• 2.1.1.1 骨髓基质细胞HS-5 的换液16
• 2.1.1.2 骨髓基质细胞HS-5 的传代16
• 2.1.1.3 骨髓基质细胞HS-5 的冻存16-17
• 2.1.2 人急性早幼粒白血病细胞HL-60的换液、传代及冻存17
• 2.1.2.1 人急性早幼粒白血病细胞HL-60的换液17
• 2.1.2.2 人急性早幼粒白血病细胞HL-60的传代17
• 2.1.2.3 人急性早幼粒白血病细胞HL-60的传代17
• 2.2 台盼蓝染色法计数细胞及鉴定细胞活力17-18
• 2.3 共培养体系的建立18
• 2.4 扫描电镜观察HL-60细胞和HS-5 细胞共培养的形态学表现18-19
• 2.5 骨髓基质细胞HS-5 对HL-60细胞增殖特性的影响19
• 2.6 AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测HL-60细胞凋亡率19
• 2.7 PI染色法流式细胞仪检测HL-60细胞周期19-20
• 2.8 RT-PCR检测HL-60细胞BCL-2、BL-XL、GLI1 mRNA表达的变化20-23
• 2.9 免疫荧光检测HL-60细胞GLI1蛋白的表达23-24
• 2.10 统计学分析24-25
• 结果（Result）25-35
• 3.1 骨髓基质细胞HS-5 和HL-60细胞共培养模型25-26
• 3.1.1 倒置显微镜观察HL-60细胞与HS-5 细胞共培养形态25
• 3.1.2 扫描电镜观察HL-60细胞与HS-5 细胞共培养形态25-26
• 3.2 CCK8试剂盒检测HL-60细胞增殖状况26-27
• 3.3 HS-5 细胞对HL-60细胞凋亡率的影响27-30
• 3.4 HS-5 细胞对HL-60细胞周期的影响30-31
• 3.4.1 48h HS-5 细胞对HL-60细胞周期的影响30
• 3.4.2 72h HS-5 细胞对HL-60细胞周期的影响30-31
• 3.5 RT-PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果31-33
• 3.5.1 总RNA电泳结果31-32
• 3.5.2 RT-PCR检测HL60细胞中BCL-2、BCL-XL、GLI 1mRNA表达32-33
• 3.6 免疫细胞荧光检测HL-60细胞GLI1蛋白的表达33-35
• 讨论（Discussion）35-38
• 结论（Conclusion）38-39
• 参考文献39-43
• 文献综述（Review）43-51
• 参考文献48-51
• 致谢（Acknowledgements）51-52
• 作者简介（Author Biography）52-53
• 导师评阅表53

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈家佩,刘秀英;骨髓基质细胞的辐射效应及其临床意义[J];中国应用生理学杂志;1988年04期

2 陈娜娜,吴曙光,郭丹;骨髓基质细胞K~+通道的膜片钳研究[J];第一军医大学学报;2000年06期

3 郑磊,王前;碱性成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞的生物学效应[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2000年01期

4 戴冰冰,卢健,陈诗书;骨髓基质细胞的特征及其在细胞和基因治疗中的应用[J];生命科学;2000年04期

5 杨吉成,盛伟华,李丽娥,董宁征,王红卫,郭tC,王晓东,杨宗华;骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究[J];中国血液流变学杂志;2000年02期

6 姜红江,孙文学,鞠成朝,谭训香;成人骨髓基质细胞培养[J];中医正骨;2000年05期

7 杨吉成,盛伟华,李丽娥,童宁征,王红卫,郭tC,王晓东;骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2001年01期

8 傅德皓,杨述华;骨髓基质细胞的生物学特性及临床应用前景[J];中华骨科杂志;2002年12期

9 罗丽;骨髓基质细胞与凋亡[J];中国局解手术学杂志;2002年04期

10 王力,王和鸣;骨髓基质细胞成骨影响因素的研究进展[J];福建中医学院学报;2003年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 仲维广;张富强;胥春;施琥;纪舒昱;;骨髓基质细胞成骨的电子探针研究[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

2 刘丽;张烈焚;;骨髓基质细胞多分化潜能的研究[A];浙江省口腔医学会第二届会员代表大会暨浙江省第二十三届口腔医学学术会议论文汇编[C];2004年

3 程明秀;赵宗江;田晨;;骨髓基质细胞的不同培养方法[A];第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2013年

4 彭琳;刘敏;薛亚楠;黄世文;卓仁禧;;侧链含伯氨基的聚酰胺胺用于骨髓基质细胞基因传递[A];2009年全国高分子学术论文报告会论文摘要集（下册）[C];2009年

5 陈铖;常智杰;张淑平;赵晓初;赵南明;张秀芳;;骨髓基质细胞的培养与诱导分化[A];2000年材料科学与工程新进展（上）——2000年中国材料研讨会论文集[C];2000年

6 王华松;陈庄洪;罗永湘;;骨髓基质细胞定向成脂分化的实验研究[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

7 温昱;秦书俭;李彬;;兔骨髓基质细胞的体外培养[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

8 王华松;陈庄洪;罗永湘;;髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力影响的实验研究[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年

9 关呈超;张富强;;高糖环境抑制骨髓基质细胞的分化和成骨[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年

10 沈健;俞康;;血宝和再障患者血清对骨髓基质细胞的影响[A];2007年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 匡远深;治脑损伤可用骨髓细胞[N];健康报;2003年

2 王雪飞 张秀花;修复软骨 骨髓基质细胞是最佳种子[N];健康报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 许贞书;人血液血管细胞生成素对骨髓基质细胞生物学作用的实验研究[D];福建医科大学;2005年

2 邹立津;家猪骨髓基质细胞的多向分化与透明质酸成骨作用的实验研究[D];南昌大学;2006年

3 唐滔;骨髓基质细胞心肌移植的初步研究[D];中南大学;2003年

4 钟池;骨髓基质细胞静脉注射治疗大鼠短暂性局灶性脑缺血的研究[D];复旦大学;2003年

5 单立冬;骨髓基质细胞向神经细胞分化及对帕金森病的治疗[D];苏州大学;2004年

6 丁鹏;骨髓基质细胞迁移机制的初步探讨及其移植治疗脊髓全横断损伤的实验研究[D];昆明医学院;2005年

7 胡军;冲击波促进出生后人骨髓基质细胞成骨分化的研究[D];中南大学;2003年

8 陈镇洲;体外扩增骨髓基质细胞、血管内皮祖细胞自体移植治疗脑缺血的实验研究[D];第一军医大学;2007年

9 黄涛;蛋白酪氨酸激酶受体B基因修饰骨髓基质细胞的实验研究[D];第一军医大学;2005年

10 罗蔚锋;联合应用骨髓基质细胞和还原型谷胱苷肽治疗帕金森大鼠实验研究[D];苏州大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨红霞;骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡的影响[D];石河子大学;2015年

2 凡芷芯;Ly-6C~+细胞对造血调控作用及造血重建中骨髓基质细胞基因表达变化[D];上海师范大学;2016年

3 孟腾腾;Hedgehog-Gli信号通路在骨髓基质细胞对急性髓系白血病细胞凋亡影响中的作用及机制研究[D];石河子大学;2016年

4 李兴泽;骨髓基质细胞迁移机制的体外实验研究[D];青岛大学;2009年

5 李丽娥;人骨髓基质细胞的生物学特性及其分化的研究[D];苏州大学;2001年

6 韦瑛;移植的人骨髓基质细胞在体内分布与安全性评价的实验研究[D];广西医科大学;2007年

7 林放;三种血小板生成关键因子共转染人骨髓基质细胞的实验研究[D];第三军医大学;2012年

8 李婷;内吗啡肽-1对正常骨髓基质细胞造血调控的影响[D];兰州大学;2009年

9 樊智敏;人脐血源基质细胞及骨髓基质细胞对造血功能损伤修复作用的比较[D];第三军医大学;2013年

10 仲维广;兔骨髓基质细胞诱导成骨及与珊瑚联合培养实验研究[D];昆明医学院;2004年

，

本文编号：568463