结直肠癌组织细菌分离培养与鉴定及脆弱拟杆菌感染细胞实验

发布时间：2017-07-20 14:24

  本文关键词：结直肠癌组织细菌分离培养与鉴定及脆弱拟杆菌感染细胞实验

  更多相关文章： 结直肠癌 细菌分离鉴定 肠毒性脆弱拟杆菌 KMB_(17)

【摘要】：[目的]在世界范围内,结直肠癌作为恶性肿瘤疾病,以其高发病率威胁着人类的健康,多年的研究证据已表明肠道菌群在结直肠癌的发生发展过程中起着重要的促进作用。本研究通过对结直肠癌组织中的厌氧菌进行分离培养与鉴定,了解组织中菌群的结构及组分；鉴定与结直肠癌的发生发展相关的核心肠道菌群,筛选与结直肠癌发生发展关系密切的细菌作为研究对象；通过细菌感染细胞实验,了解分离所得肠毒性脆弱拟杆菌对KMB17细胞的感染能力。[方法]采集51例2014年至2015年结直肠癌患者手术的组织样本；在厌氧条件下分离样本中的细菌,经PCR扩增细菌16SrRNA基因,利用16SrRNA基因可变区菌属间变异性鉴定细菌种属；通过分离得到细菌的检出率确定结直肠癌组织中的核心菌群；利用分离得到的肠毒性脆弱拟杆菌感染KMB17细胞,通过透射电镜和免疫荧光法观察感染情况。[结果]本实验从组织样本中经厌氧培养分离鉴定出172株、35种细菌,其中费格森埃希菌、粪肠球菌、脆弱拟杆菌、多形拟杆菌等检出率较高,是结直肠癌组织样本中的核心菌群；通过透射电镜及免疫荧光检测均可在细胞内观察到肠毒性脆弱拟杆菌,证实肠毒性脆弱拟杆菌成功进入胞内感染KMB17细胞。[结论]在结直肠癌肿瘤组织样本中致病菌或条件致病菌较益生菌在种类数量上都有一定优势,费格森埃希菌、粪肠球菌、脆弱拟杆菌、索氏志贺氏菌等致病菌和条件致病菌在结直肠癌的发生发展过程中可能起着重要作用；分离所得肠毒性脆弱拟杆菌能成功进入细胞内感染KMB17细胞。
【关键词】：结直肠癌 细菌分离鉴定 肠毒性脆弱拟杆菌 KMB_(17)
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-13
• 材料和方法13-24
• 1 材料13-15
• 1.1 组织样本13
• 1.2 产肠毒素的脆弱拟杆菌13
• 1.3 KMB_(17)细胞13
• 1.4 实验动物13
• 1.5 设备与试剂13-15
• 2 方法15-24
• 2.1 组织样本中厌氧菌及兼性厌氧菌的分离培养与鉴定15-20
• 2.2 ETBF对KMB_(17)细胞的感染实验20-24
• 结果24-33
• 1 癌旁组织样本细菌分离情况24
• 2 结直肠癌组织样本中细菌分离情况24-25
• 3 细菌检出数及检出率25-29
• 4 ETBF鉴定结果29
• 5 感染后倒置显微镜下细胞状态观察29-30
• 6 透射电镜观察结果30-32
• 7 免疫荧光检测结果32-33
• 讨论33-39
• 结论39-40
• 参考文献40-49
• 附录49-52
• 综述52-64
• 参考文献60-64
• 攻读学位期间获得的学术成果64-65
• 致谢65

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本文编号：568496