NS-398抑制结肠癌HCT-8细胞增殖及调节凋亡相关分子表达研究

发布时间：2017-07-20 14:26

  本文关键词：NS-398抑制结肠癌HCT-8细胞增殖及调节凋亡相关分子表达研究

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【摘要】：结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)作为全球的常见病、多发病,严重危害人类生命健康。虽然近些年有关对结直肠癌的研究已取得了很大的进展,但治疗效果仍不十分满意,其发病率及死亡率仍呈上升趋势。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是合成前列腺素的限速酶,在人类多种肿瘤细胞中存在着过度表达,对肿瘤的发生、发展及侵袭和转移起到了很大的作用。非甾体类抗炎药(non-steroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)NS-398是特异性COX-2抑制剂,能够较强抑制COX-2蛋白表达。近年来研究发现,非甾体类抗炎药具有抗肿瘤作用,其作用主要是通过抑制COX-2表达实现的。survivin作为最强的凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protein,IAP),可与效应分子caspase-3、caspase-7结合,下调其活性,进而阻止细胞凋亡。本课题从肿瘤的自主增殖和凋亡失调的角度出发,研究COX-2选择性抑制剂诱导结肠癌细胞凋亡的作用靶点及其机制,为预防肿瘤发生及肿瘤的新辅助治疗提供理论依据。本课题以结肠癌细胞株HCT-8为研究对象,观察COX-2选择性抑制剂NS-398对癌细胞增殖及凋亡的影响,研究其对COX-2、survivin以及caspase3/7表达的调控,以初步探讨其可能分子机制。应用CCK-8法测定NS-398对HCT-8细胞的抑制率;进一步采用流式细胞术(FCM)测定HCT-8细胞的凋亡率以及Hoechst33342染色观察凋亡癌细胞核的形态改变;免疫细胞化学法检测NS-398作用前后结肠癌细胞COX-2和survivin蛋白的表达;ELISA法检测NS-398作用前后培养液中前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)含量的变化;酶标仪检测caspase3/7的活性。通过上述研究探讨以下几个问题:探讨COX-2选择性抑制剂NS-398剂量及其对结肠癌细胞的生长抑制率,并进一步明确NS-398诱导结肠癌细胞凋亡作用;探讨NS-398是否能够抑制HCT-8细胞COX-2和survivin蛋白的表达,下调caspase3/7的活性,及是否能够降低细胞液中PGE_2的含量,以初步探讨其诱导凋亡的分子机制。结果发现,NS-398可抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,抑制作用具有时间、浓度依赖性,40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用组间差异有显著性(P0.05);FCM结果显示,40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用24 h后,细胞凋亡率分别为12%,17%及26%,且呈剂量依赖性,表明NS-398可诱导HCT-8细胞凋亡;Hoechst33342染色从形态学上也得出相一致的结论;40,80,160μmol·L~(-1) NS-398作用24 h后,免疫细胞化学法研究结果发现,癌细胞COX-2、survivin蛋白表达均由强阳性变为弱阳性;ELISA结果显示细胞培养上清液中PGE_2含量分别为384.915 ng·L~(-1),292.111 ng·L~(-1)及132.408 ng·L~(-1),较对照组时的446.818ng·L~(-1)明显下降;同时随着NS-398处理浓度的增加,caspase3/7活性上调,在高浓度时尤为明显,具有剂量-效应关系。研究结果表明,COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌细胞有显著的生长抑制作用,主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡作用实现的,其机制可能是在抑制COX-2蛋白表达的同时抑制survivin蛋白的表达,进而上调caspase3/7的活性,其次NS-398能够抑制PGE_2生成,从而诱导癌细胞凋亡,这将为预防肿瘤发生及肿瘤的新辅助治疗提供理论依据。
【关键词】：结肠癌 COX-2选择性抑制剂 细胞凋亡 survivin caspase3/7
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-21
• 附图21-25
• 附表25-27
• 讨论27-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述 环氧合酶-2 抑制剂抗肿瘤作用研究进展35-45
• 参考文献40-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

【参考文献】

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本文编号：568521