p53及其上游基因ATM、下游基因PUMA在大肠癌中的表达及意义

发布时间：2017-07-20 16:17

  本文关键词：p53及其上游基因ATM、下游基因PUMA在大肠癌中的表达及意义

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【摘要】：目的:大肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,大肠癌的发生发展是是一个多因素、多步骤的过程,在经过DNA甲基化、DNA受损、多个癌基因和抑癌基因表达异常的作用下导致肿瘤的发生,而抑癌基因的突变或缺失是大肠癌发生发展的主要分子生物学改变。其中抑癌基因p53及其上下游基因ATM、PUMA在大肠癌的发生发展中起着重要作用。p53基因包含野生型和突变型。野生型p53基因可以通过阻滞细胞周期、修复受损DNA、促进细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等产生抑癌作用,突变型p53可以通过对野生型p53蛋白负性调控、诱导使染色体不稳定促进肿瘤的发生发展。野生型p53蛋白的半衰期约30分钟,用免疫组化方法很难检测到;而突变型p53蛋白由于其空间构象发生改变,因此难以降解,其半衰期延长至数小时,可以用免疫组化检测出,因此当使用免疫组化法检测到组织中p53表达时,均为突变型p53。ATM基因是p53基因的上游调控基因,其在DNA损伤尤其是辐射等导致的DNA双链断裂的感应及修复、细胞周期的调控、细胞凋亡中都发挥着重要的作用。PUMA基因是p53基因的下游靶基因,是一个促凋亡启动基因,在多种应激诱发的细胞依赖p53及非依赖p53机制诱导凋亡中起关键作用。目前国内外对p53与大肠癌的相关研究报道较多,对ATM、PUMA与大肠癌的相关研究报道较少,并且主要在细胞株中研究。目前尚未见联合检测p53及其上下游基因ATM、PUMA与大肠癌的相关研究报道。本研究拟采用免疫组化法通过联合检测p53、ATM、PUMA在大肠癌中的表达情况,探讨p53及其上下游基因ATM、PUMA在大肠癌发生发展中的相互作用,以期为探讨大肠癌的发病机制、协助临床诊断治疗以及判断预后提供实验依据。实验方法:收集四川省人民医院2013年-2014年未行放化疗、手术切除后病理诊断证实为大肠癌的存档组织蜡块60例,正常对照组20例则取距大肠癌末端5cm以外的大肠组织。整理临床资料,并采用免疫组化Envision两步法检测p53、ATM、PUMA在大肠癌和大肠癌旁正常组织中的表达情况,并分析其表达与临床病理资料的关系。统计学方法:所有结果均采用SPSS19.0软件包进行统计学处理,以α=0.05为检验水准。计数资料应用x2检验;等级相关分析应用Spearman相关性分析。结果：1.突变型p53在大肠癌中阳性表达率为61.67%(37/60),在癌旁正常组织为25%(5/20);突变型p53在大肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。突变型p53的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无关,差异无统计学意义(P0.05);突变型p53与肿瘤发生部位、临床TNM分期、浸润深度、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关,差异均有统计学意义(P0.05)。2.ATM在大肠癌中的表达率为35%(21/60),在癌旁正常组织中的表达率为60%(12/20);ATM在大肠癌中的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。ATM的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、发生部位、淋巴结转移、肿瘤病理分化程度和浸润深度无关,差异无统计学意义(P0.05),ATM的表达与结肠癌临床TNM分期有关,差异有统计学意义(P0.05)。3.PUMA在大肠癌中的表达率为36.67%(22/60),在癌旁正常组织中的表达率为65%(13/20);PUMA在大肠癌的阳性表达率低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。PUMA的表达与患者年龄、性别、是否伴有淋巴结转移无关,差异无统计学意义(P0.05);PUMA的表达与肿瘤大小、发生部位、浸润深度、TNM分期、肿瘤病理分化程度有关,差异均有统计学意义(P0.05)。4.p53的表达与ATM和PUMA的表达成负相关关系(r=0.363,x2=7.904,P0.05;r=0.315,x 2=5.967,P0.05)。ATM的表达与PUMA的表达无相关关系(r=0.167,x 2=1.669,P0.05)。结论：1.突变型p53在大肠癌中的阳性表达率增高,提示突变型p53可能通过促进大肠癌细胞的增殖以及抑制大肠癌细胞的凋亡,促进了大肠癌的发生。ATM在大肠癌中的阳性表达率降低,提示ATM基因可能由于发生突变,其蛋白表达减少,进而降低了其对大肠癌的防御功能,可能是大肠癌的发生原因之一。PUMA在大肠癌中的阳性表达率降低,可能是其上游基因p53发生突变,抑制了PUMA的表达,因此促凋亡功能受到抑制,导致肿瘤细胞恶性增殖。2.突变型p53在中低分化组、TNM晚期大肠癌组、浸润浆膜组和伴淋巴结转移组大肠癌中阳性表达率增高,ATM在TNM晚期大肠癌组中阳性表达率减低,PUMA在中低分化组、TNM晚期大肠癌组和浸润浆膜组大肠癌中阳性表达率减低,提示突变型p53、ATM和PUMA可能与大肠癌的预后有关,可能对评估大肠癌患者的预后有一定帮助。3.ATM和突变型p53在大肠癌中存在负相关,突变型p53和PUMA在大肠癌中也存在负相关,提示ATM基因可能因为发生突变,蛋白表达减少,导致下游基因野生型p53的表达降低,突变型p53出现高表达,同时突变型p53的表达增高会抑制PUMA的表达,使PUMA促凋亡功能受抑。这些都表明ATM-p53-PUMA调控途径可能在大肠癌发生、发展过程中起着重要作用;联合检测ATM、p53、PUMA可能对从分子水平了解大肠癌的发生发展提供新的思路。也对评估大肠癌患者的预后和选择合理的治疗手段有一定帮助。
【关键词】：p53 ATM PUMA 大肠癌
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-9
• Abstarct9-14
• 前言14-16
• 1 对象与方法16-20
• 1.1 研究对象16-17
• 1.2 TNM 分期标准17-18
• 1.3 主要实验仪器18
• 1.4 主要试剂18
• 1.5 免疫组化染色步骤18-19
• 1.6 评分标准19
• 1.7 统计学分析19-20
• 2 结果20-25
• 2.1 p53、ATM、PUMA在癌旁正常组织和大肠癌组织中的表达情况20-21
• 2.2 p53、ATM、PUMA与大肠癌临床病理资料的关系分析21-24
• 2.3 大肠癌中p53、ATM、PUMA的相关性分析24-25
• 3 讨论25-31
• 3.1 p53 在大肠癌的表达与意义26-27
• 3.2 ATM 在大肠癌的表达与意义27-29
• 3.3 PUMA 在大肠癌的表达与意义29-30
• 3.4 ATM、PUMA 与突变型 p53 的相关性及联合检测意义30-31
• 4 结论31-33
• 附图33-35
• 参考文献35-38
• 综述：P53 及其上游基因ATM、下游基因PUMA在大肠癌中的研究进展38-51
• 参考文献47-51
• 附录51-53
• 个人简历53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 翟荣林;王国斌;蔡开琳;;结直肠癌相关基因甲基化研究现状和进展[J];中华肿瘤防治杂志;2008年07期

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3 李革;;ATM基因与大肠癌放射敏感性关系的研究进展[J];世界华人消化杂志;2012年25期

4 陈万青;郑荣寿;曾红梅;邹小农;张思维;赫捷;;2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J];中国肿瘤;2015年01期

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本文编号：568911