联合检测HER-2基因扩增和K-RAS基因突变在胃癌组织中的意义

发布时间：2017-07-30 06:23

  本文关键词：联合检测HER-2基因扩增和K-RAS基因突变在胃癌组织中的意义

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【摘要】：背景胃癌是常见的恶性肿瘤,世界每年新增胃癌患者超过93万,而我国就占60%,发病率和死亡率超过全球平均水平两倍,其发病率呈逐年上升、年轻化趋势,近年来,青年人胃癌的发病率较上世纪80年代翻了一番。外科手术切除是胃癌的首要治疗方式,早期胃癌患者通过手术可以治愈。但多数胃癌患者在确诊时已达中晚期,即使采用以外科手术、化疗、放疗和激素治疗等为主的综合治疗,效果依然欠佳,5年生存率不到20%。因此,寻找新的治疗途径如分子靶向治疗成为胃癌研究的热点。人类表皮生长因子受体2(HER-2)在胃癌组织中高表达,与胃癌的预后密切相关,可指导胃癌的分子靶向治疗。胃癌中,K-RAS基因的突变率为9%,K-RAS突变导致MAPK通路不依赖于EGFR的结构性激活,从而影响西妥昔单抗的疗效。HER-2基因在胃癌方面的研究较多,而K-RAS基因在结直肠癌方面的研究较多,但在胃癌中的研究却鲜有报道。有研究表明,结直肠癌的发展与HER-2和K-RAS的协同作用有关,那么两者在胃癌的发生发展中是否有意义呢?因此,本文通过探讨HER-2基因扩增与K-RAS基因突变在胃癌中的意义,了解抗肿瘤药物治疗的靶点,为胃癌靶向抗肿瘤药物治疗提供更好的帮助。目的探讨胃癌组织中HER-2蛋白表达和基因扩增的关系,以及HER-2基因扩增与K-RAS基因突变的意义。方法收集解放军第150中心医院2013年6月到2015年10月病理科手术切除的胃癌根治标本67例。新鲜标本经10%中性福尔马林固定,分别进行常规HE染色、免疫组化染色(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和基因测序的检测。结果1.HER-2蛋白阳性表达定位在细胞膜,阳性表达率为40.3%(27/67),其表达率与胃癌的浸润深度(P0.05)、淋巴结转移(P0.05)差异有显著性,与性别(P0.05)、发病年龄(P0.05)以及组织学类型(P0.05)无显著相关性。2.HER-2蛋白表达40.3%(27/67),其中HER-2阳性3+者9.0%(6/67)。HER-2蛋白2+者13.4%(9/67)。HER-2蛋白1+者17.9%(12/67)。FISH检测HER-2基因扩增率18.5%(5/27),HER-2基因拷贝数增加和基因扩增者共48.1%(13/27)。3.K-RAS基因突变定量检测7.5%(5/67),均为K-RAS基因第12密码子突变,其中低于10%低峰度突变2例,高于10%的高峰度突变3例(突变数值分别为:17、29、30)。除1例为GGT→GAT突变型外,其它均为GGT→GTT突变型。本组K-RAS基因突变5例中除1例既有K-RAS基因突变,又有HER-2基因扩增,另外的4例HER-2基因无扩增。结论1.HER-2的蛋白表达率与胃癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关。HER-2的蛋白表达和基因扩增有高度的一致性,免疫组化法检测胃癌HER-2蛋白表达可作为临床治疗的筛查手段,对于HER-2蛋白表达(2+)的患者应常规行荧光原位杂交检测;2.胃癌组织中HER-2检测有很大的异质性,HER-2检测规范和细化是正确指导用药的保证。本研究强调HER-2检测的强度和范围,HER-2蛋白表达划分为广泛型、部分型和局灶型,HER-2基因划分为簇状、大颗粒状、点状和高多体性,能更好的为靶向抗肿瘤药物治疗过程中受益提供量化的参考指标;3.检测胃癌的HER-2基因,扩增时可选用抗肿瘤药物治疗的靶点曲妥珠单抗,同时检测K-RAS基因,可选用针对野生型K-RAS基因的抗肿瘤药物治疗的靶点西妥昔单抗;胃癌HER-2基因扩增和K-RAS基因突变的联合检测能更好的为靶向抗肿瘤药物治疗过程中受益提供参考指标。
【关键词】：胃癌 HER-2基因 K-RAS基因 FISH IHC 基因测序
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 1 材料13-14
• 1.1 研究对象13
• 1.2 制片13
• 1.3 主要试剂盒仪器13-14
• 2 方法14-18
• 2.1 组织学染色方法14
• 2.2 免疫组化及FISH操作前载玻片的处理14
• 2.3 SP免疫组化染色法14-15
• 2.3.1 免疫组化染色操作步骤14-15
• 2.3.2 免疫组化染色强度的判读15
• 2.4 FISH技术检测15-16
• 2.4.1 FISH操作步骤15-16
• 2.4.2 FISH结果判读16
• 2.5 K-RAS基因突变定量检测-焦磷酸测序法16-18
• 2.5.1 样本处理、核酸提取及PCR体系的配制及产物16-17
• 2.5.2 测序设置及分析17-18
• 2.5.3 结果报告18
• 2.6 统计学分析18
• 3 结果18-20
• 3.1 HER-2 基因扩增与蛋白表达率及其关系18-19
• 3.2 HER-2 基因扩增与蛋白表达率及其关系19
• 3.3 K-RAS基因突变率及突变量19-20
• 3.4 HER-2 基因扩增与K-RAS基因突变率的关系20
• 4 讨论20-25
• 参考文献25-28
• 附图28-33
• 综述 胃癌分子靶向治疗的研究进展33-48
• 参考文献42-48
• 中英文缩略语对照表48-49
• 攻读学位期间发表文章情况49-50
• 致谢50-51
• 个人简历51-52

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本文编号：592860