白细胞和白血病细胞荧光光谱特征研究

发布时间：2017-08-01 04:18

  本文关键词：白细胞和白血病细胞荧光光谱特征研究

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【摘要】：白血病是严重危害人类健康的造血系统恶性肿瘤,近年来白血病发病率和死亡率不断升高。2010年,我国城市居民死亡原因中,恶性肿瘤居首位,约占总数的1/3,其中白血病在恶性肿瘤占2.9%。传统的白血病诊断方法主要有周围血象检查、骨髓检查、细胞遗传学检查等。荧光光谱技术是依据激发光激发下不同物质分子荧光光谱存在差异,进而可通过相关的检测手段区分出不同的物质分子的一种光谱检测技术,具有灵敏度高、非介入等特点。目的：基于荧光稳态测量系统QuantaMaster,利用白细胞和白血病细胞白体荧光光谱以及外源性荧光光谱实现白细胞和白血病细胞辨别。为提取外周血实现白血病荧光光谱诊断奠定理论基础,并推动荧光光谱技术在白血病诊断中的应用。方法：检测370nm、400nm和440nm激发光激发下白细胞和白血病细胞的自体荧光光谱,以及405nm激发光下ALA (Omg/ml、0.125mg/ml、0.25mg/ml、 0.5 mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml)和PSD-007 (Oug/ml、6.25ug/ml、12.5ug/ml、 25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml)孵育2小时的白血病细胞的荧光光谱,并结合特征峰积分和光谱归一化方法进行分析。最后利用峰相对强度比和光谱差减法,分析了370nm、400nm和440nm激发光激发下白细胞和白血病细胞自体荧光光谱的差异,以及400nm、440nm激发光激发下基于ALA的荧光光谱的差异。结果：不同波长激发光下P628未发生红移或蓝移,峰值大小不同。基于ALA、PSD-007的白血病细胞荧光发射光谱,不同光敏剂浓度下P636、P626起始位置保持不变,峰值大小不同。400nm激发下,白细胞自体荧光光谱的I628/I515约是白血病细胞的2.9倍,差减光谱P628峰面积百分比约为91.4%；基于ALA的白细胞的I628/I515约是白血病细胞的8.6倍,差减光谱P628峰面积百分比约为96.5%。结论：激发光波长及光敏剂浓度对荧光峰位置无影响,只影响荧光强度；特征峰积分和光谱差减分析下,白细胞与白血病细胞的自体荧光和外源性荧光特征差异明显。
【关键词】：白血病 自体荧光光谱 外源性荧光光谱
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7;O657.3
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• 摘要7-8
• ABSTRACT8-10
• 第一章 绪论10-19
• 1.1 研究背景10-14
• 1.1.1 白血病简介10-12
• 1.1.2 白血病传统诊断方法12-13
• 1.1.3 光谱检测技术在白血病诊断中的应用13-14
• 1.2 荧光光谱技术及其在医学诊断中的应用14-16
• 1.2.1 自体荧光法诊断及其应用14-15
• 1.2.2 外源性荧光诊断及其应用15-16
• 1.3 立题依据和创新点16-17
• 1.4 论文结构17-19
• 第二章 仪器材料与方法19-21
• 2.1 仪器材料19
• 2.2 方法19-21
• 2.2.1 白血病细胞培养19
• 2.2.2 脾脏白细胞分离19
• 2.2.3 白血病细胞溶液配制19
• 2.2.4 白细胞溶液配制19
• 2.2.5 细胞光敏剂孵育19-20
• 2.2.6 白血病细胞裂解20-21
• 第三章 自体荧光光谱特征分析21-28
• 3.1 目的和方法21-22
• 3.1.1 白细胞荧光激发光谱测量21
• 3.1.2 完全培养基荧光发射光谱测量21
• 3.1.3 白细胞荧光发射光谱测量21-22
• 3.1.4 白血病细胞荧光发射光谱测量22
• 3.2 结果22-26
• 3.2.1 白细胞荧光激发光谱22-23
• 3.2.2 不同波长激发光激发下完全培养基的荧光发射光谱23
• 3.2.3 不同波长激发光下白细胞的荧光发射光谱23-24
• 3.2.4 不同波长激发光下白血病细胞的荧光发射光谱24-26
• 3.3 结论26
• 3.4 讨论26-27
• 3.5 本章小结27-28
• 第四章 外源性荧光光谱特征分析28-41
• 4.1 目的和方法28-29
• 4.1.1 不同浓度ALA孵育下白血病细胞荧光发射光谱的测量28
• 4.1.2 不同浓度ALA孵育下白血病细胞裂解后荧光发射光谱的测量28
• 4.1.3 不同浓度PSD-007孵育下白血病细胞荧光发射光谱的测量28
• 4.1.4 不同浓度PSD-007孵育下白血病细胞裂解后荧光发射光谱的测量28-29
• 4.2 结果29-33
• 4.2.1 不同ALA浓度孵育下白血病细胞(未裂解)荧光发射光谱29-30
• 4.2.2 不同ALA浓度孵育下白血病细胞(裂解后)荧光发射光谱30-31
• 4.2.3 不同PSD-007浓度孵育下白血病细胞(未裂解)荧光发射光谱31-32
• 4.2.4 不同PSD-007浓度孵育下白血病细胞(裂解后)荧光发射光谱32-33
• 4.3 特征算法分析33-38
• 4.3.1 不同ALA浓度对白血病细胞(未裂解和裂解后)荧光发射光谱33-36
• 4.3.1.1 特征峰积分分析33-35
• 4.3.1.2 光谱归一化分析35-36
• 4.3.2 不同PSD-007浓度对白血病细胞(未裂解和裂解后)荧光发射光谱36-38
• 4.3.2.1 特征峰积分分析36-37
• 4.3.2.2 光谱归一化分析37-38
• 4.4 结论38
• 4.5 讨论38-40
• 4.6 本章小结40-41
• 第五章 白细胞与白血病细胞荧光特征光谱差异分析41-54
• 5.1 目的和方法41
• 5.1.1 白细胞和白血病细胞自体荧光发射光谱测量41
• 5.1.2 ALA孵化下白细胞和白血病细胞荧光发射光谱测量41
• 5.2 结果41-43
• 5.2.1 不同波长激发光激发下白细胞与白血病细胞自体荧光发射光谱41-42
• 5.2.2 不同波长激发光激发下对基于ALA的白细胞与白血病细胞荧光发射光谱42-43
• 5.3 特征算法分析43-50
• 5.3.1 白细胞与白血病细胞自体荧光光谱分析43-47
• 5.3.1.1 特征峰积分分析43-45
• 5.3.1.2 峰相对强度比分析45
• 5.3.1.3 光谱差减分析45-47
• 5.3.2 白细胞与白血病细胞光敏剂激发荧光光谱分析47-50
• 5.3.2.1 特征峰积分分析47-48
• 5.3.2.2 峰相对强度比分析48-49
• 5.3.2.3 光谱差减分析49-50
• 5.4 结论50-51
• 5.5 讨论51-52
• 5.6 本章小结52-54
• 第六章 总结及展望54-55
• 参考文献55-59
• 发表论文及专利59-60
• 致谢60

【参考文献】

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本文编号：602461