miR-202在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义初步研究

发布时间：2017-08-01 09:07

  本文关键词：miR-202在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义初步研究

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【摘要】：背景:肝细胞癌是一种常见的高恶性程度的消化系统肿瘤,死亡率居全球第三。肝癌早期诊断水平与其预后息息相关,但由于其早期发现困难,确诊多属肿瘤晚期,导致传统放化疗及手术治疗效果不佳。目前肝癌诊断主要依靠血清AFP水平,但其敏感性及特异性不甚理想,因此寻找新的无创生物标记物尤为重要。大量研究发现miRNAs与肿瘤的发生发展密切相关,且具有很强的细胞、组织特异性,可作为潜在的诊断标志物。miRNA是一类小分子非编码RNA,因其靶基因众多、调控机制复杂成为近来研究热点。研究表明肝癌中存在许多信号通路的异常激活,例如Notch、Wnt及Hedgehog(Hh)通路等。其中Hh通路是一条在胚胎发育时期调节细胞生长与分化的高度保守的形态发生通路,其异常激活与肝癌的发生、发展紧密相关。Glil(Glioma-associated Oncogene Homolog l,Glil)基因是Hh通路的核转录因子,其激活直接导致Hh信号通路下游目的基因转录水平的改变。已有文献报道miRNA可以靶向抑制Hh信号通路因子参与Hh信号通路的活化,两者协同调控肿瘤的发生、发展进程。在众多靶向调控Gli1基因的肝癌相关miRNAs中,miR-202在肝癌组织中的表达水平仅被报道一次,迄今尚无文献报道miR-202在肝癌血清中的表达水平及其与肝癌患者临床病理特征之间的联系,以及在肝癌发生、发展过程中与Hh通路之间的相互作用。本研究通过检测miR-202在原发性肝癌中的表达水平,分析其在肝癌中的临床意义及潜在诊断价值,进一步探讨Hh通路在肝癌中的的协同调控机制。目的:检测miR-202在肝癌细胞、FFPE组织及血清中的表达情况,分析miR-202表达量与肝癌临床病理参数之间的联系,评价mir-202作为特异性生物标志物对肝癌的潜在诊断价值,初步探讨mir-202与hedgehog通路在肝癌中的作用,为进一步深入了解肝癌发病的分子机制提供依据。方法:采用real-timert-pcr方法,分别以lo2细胞株、正常肝脏ffpe组织及健康志愿者血清作为对照,以u6为内参,检测mir-202在肝癌细胞株、ffpe组织及血清标本中的中的表达情况,分析其与肝癌临床病理参数的关系,并利用spss21.0软件绘制mir-202、afp及两者联合对肝癌的诊断roc曲线,评价mir-202对肝癌的潜在诊断价值;以正常肝脏ffpe组织作为对照,以gadph基因作为内参,检测gli1基因在肝癌中的表达水平,采用spss软件分析其与mir-202表达水平之间的相关性,为进一步深入探讨肝癌发生发展的分子机制提供初步依据。其中3株肝癌细胞株和lo2细胞为重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室惠赠,70例肝癌ffpe组织及血清标本来自四川医科大学附属医院2013年07月-2014年09月诊治的70例原发性肝癌患者。结果:1.mir-202在肝癌细胞株中的表达较人正常肝细胞系lo2的表达均显著降低(p0.05),mir-202在肝癌癌细胞株hepg2的表达量最低(0.0394±0.0141),显著低于lo2细胞株(p0.05);肝癌ffpe组织及血清mir-202表达量均较正常对照显著降低(p0.05)。2.肝癌ffpe中mir-202的低表达和肝癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤最大径、临床分期、局部淋巴结转移、远处转移和afp浓度等肿瘤临床特征无关(p0.05);肝癌血清mir-202表达量仅与肿瘤数目有关(p0.05);mir-202在同一患者肝癌血清中的表达量(0.33±0.30)显著低于肝癌组织标本中表达量(0.51±0.26)(p0.05)。3.mir-202和afp肿瘤标志物联合检测可获得较高的敏感度(81.8%)和特异度(93.0%),曲线下面积最大(0.942),并获得高于单一miR-202或者AFP的特异性、Youden指数、阳性似然比/阴性似然比。4.Gli1基因在肝癌组织中的表达水平(3.45±2.07)相较于正常肝脏组织(1.34±0.58)明显升高,两组之间差异存在统计学意义(P0.05),在肝癌FFPE组织中,mi R-202表达水平与Gli1基因表达水平存在一定相关性(r=0.583,P0.005)。结论:1.miR-202在肝癌发生、发展过程中可能发挥相应的生物学作用,其表达下调可能是肝癌发生的早期事件,且在肝癌中表达稳定。2.miR-202联合AFP对肝癌诊断价值优于单一AFP,提示miR-202与AFP的联合诊断价值大于单独指标的诊断价值。3.Hh通路中的核转录因子Gli1在肝癌中可能发挥一定作用,Gli1基因与miR-202可能在肝癌中的表达水平存在一定相关性。
【关键词】：原发性肝癌 mi R-202 生物标记物 Hedgehog通路 Gli1
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-13
• 第一部分miR-202在肝癌中的表达情况及其在肝癌中的诊断价值分析13-37
• 材料与方法13-23
• 结果23-32
• 讨论32-37
• 第二部分 人肝癌组织miR-202与Hedgehog通路中Gli1表达的相关性分析37-49
• 材料与方法37-43
• 结果43-45
• 讨论45-49
• 结论49-50
• 参考文献50-55
• 英汉缩略词对照表55-57
• 致谢57-58
• miRNA与Hh信号通路在肿瘤中的研究进展58-73
• 参考文献69-73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 薛洋;曾富春;舒骏;丛伟;;福尔马林固定石蜡包埋样本提取的RNA质量分析及其临床应用[J];实验与检验医学;2015年01期

2 汤钊猷;;从肝癌看癌症临床研究[J];肿瘤;2009年01期

3 Yu Gong;Jun Ren;Kun Liu;Li-Ming Tang;;Tumor suppressor role of mi R-133a in gastric cancer by repressing IGF1R[J];World Journal of Gastroenterology;2015年10期

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本文编号：603461