14-3-3θ对乳腺癌恶性生物学行为的影响及其机制研究

发布时间：2017-08-04 16:37

  本文关键词：14-3-3θ对乳腺癌恶性生物学行为的影响及其机制研究

  更多相关文章： 14-3-3θ 乳腺癌 耐药性 恶性生物学

【摘要】：研究背景近几年,随着人们生活水平的提高,乳腺癌的发病率也迅速的增长着,目前乳腺癌已逐步成为女性发病率最高的恶性肿瘤之一,对女性的健康造成严重危害[1]。乳腺癌的治疗模式随着循证医学和分子生物学的飞速发展,已经从传统的手术治疗转变为现在的多种方式综治疗治疗,乳腺癌患者的预后得到显著改善。但是由于乳腺癌细胞的侵袭迁移和对靶向药物及化疗药物的耐药,导致乳腺癌患者最终复发转移。所以寻找乳腺癌有效的治疗靶点和预后预测因子,将会为乳腺癌的治疗提供新的策略。14-3-3蛋白家族广泛表达于真核生物细胞,是一类高度保守的小分子多功能酸性二聚体蛋白。14-3-3蛋白家族包括由七个不同基因编码而成的七个亚型(β、γ、ε、σ、ε、ζ和δ),它们在调控细胞内信号转导、新陈代谢、细胞周期与凋亡等方面发挥作用[2]。现有研究表明,14-3-3蛋白家族的七个亚型中唯有14-3-3θ可以通过减少真核细胞核输出核转录因子kappa B(NF-κB)从而发挥对肿瘤的抑制作用[3],其他亚型分别与不同肿瘤细胞的侵袭、增殖、迁移正相关[4]。脑膜瘤中14-3-3θ亚型高表达,并随着脑膜瘤的恶性程度升高其表达水平逐步增加,14-3-3θ与脑膜瘤的恶化相关[5]。有研究提示14-3-3θ的表达与乳腺癌淋巴结转移正相关,推测14-3-3θ可能是乳腺癌侵袭转移的一个潜在预测分子[6]。但是14-3-3θ对乳腺癌生物学行为的影响及其潜在的分子机制仍不明确。那么14-3-3θ对乳腺癌细胞的增殖、周期和凋亡有何影响?14-3-3θ与乳腺癌的预后有无关联?14-3-3θ能否成为乳腺癌新的治疗靶点?带着这些问题,我们首先构建并筛选了过表达14-3-3θ的乳腺癌细胞,然后进行了14-3-3θ对乳腺癌细胞生物学行为影响及其机制的探索。研究方法和结果1.构建并筛选过表达14-3-3θ的乳腺癌细胞系:将订购的p ENTR 3C DUAL载体中14-3-3θ基因重组至真核表达质粒载体pc DNA4.0中,用重组后的真核过表达载体pc DNA4.0-14-3-3θ转染293T细胞,western blot进行鉴定,将重组成功的真核表达载体pc DNA4.0-14-3-3θ转染AU-565、MCF-7和BT-474,抗生素筛选,经过筛选的乳腺癌细胞通过western blot鉴定,成功构建过表达14-3-3θ的乳腺癌细胞系。2.14-3-3θ对乳腺癌细胞生物学行为影响的研究:(1)western blot实验检测14-3-3θ在五株乳腺癌细胞系中的表达水平(2)MTT实验分别检测MCF-7和AU-565过表达14-3-3ζ后的细胞增殖活性的变化;(3)平板克隆实验分别检测MCF-7和AU-565过表达14-3-3θ后克隆形成能力的变化;(4)流式细胞仪分别检测MCF-7和AU-565过表达14-3-3θ后细胞凋亡的差异变化;(5)划痕实验分别检测MCF-7和AU-565过表达14-3-3θ后细胞迁移能力的变化;(6)分别通过用过表达14-3-3θ的乳腺癌细胞MCF-7和AU-565荷瘤裸鼠,观察实验14-3-3θ表达升高与否对裸鼠移植瘤生长的作用,取瘤体行免疫组织化学染色,观察相应指标的变化。结果:14-3-3θ在五株乳腺癌细胞系中表达存在差异,这种差异可能和乳腺癌细胞的恶性程度相关。14-3-3θ的表达升高可以促进乳腺癌细胞增殖、迁移、克隆形成能力、减少乳腺癌细胞的凋亡以及促进裸鼠移植瘤的生长,综上所述,14-3-3θ可以促进乳腺癌的恶性生物学行为。MCF-7和AU-565过表达14-3-3θ后对阿霉素,他莫昔芬,赫赛汀敏感性的变化研究:细胞杀伤曲线分别检测MCF-7和AU-565过表达14-3-3θ后对不同浓度梯度阿霉素,他莫昔芬,赫赛汀敏感性的变化。结果:14-3-3θ表达升高可以降低MCF-7对阿霉素的敏感性,能够降低ER阳性乳腺癌细胞MCF-7对他莫昔芬的敏感性,还可以降低HER-2阳性乳腺癌细胞AU-565对赫赛汀的耐药性。14-3-3θ过表达引起HER-2阳性乳腺癌细胞AU-565对赫赛汀的敏感性差异最为明显。3.14-3-3θ表达升高引起乳腺癌对阿霉素、他莫昔芬及赫赛汀敏感性降低的机制初探:(1)western blot检测14-3-3ζ表达升高与否对AU-565和MCF-7对m TOR、p-m TOR、Akt、p-Akt等蛋白表达水平的影响。用赫赛汀分别处理表达不同水平14-3-3θ的AU-565,western blot检测Bcl-2、Bax和PARP等相关蛋白表达的变化;(2)分别用表达不同水平14-3-3ζ的HER-2阳性乳腺癌细胞BT-474注射裸鼠成瘤,然后给予裸鼠赫赛汀处理,观两组裸鼠瘤体对赫赛汀治疗的敏感性,取瘤体免疫组织化学染色观察相应蛋白的表达差异。结果:14-3-3θ降低乳腺癌细胞对阿霉素、他莫昔芬及赫赛汀的敏感性作用可能与Akt和m TOR的活化增多有关,其中14-3-3θ的过表达能够下调HER-2阳性乳腺癌对赫赛汀的敏感性很可能与Akt和m TOR的活化增多,凋亡相关蛋白Bcl-2与PARP的表达升高,Bax表达下降有关。结论1.五株乳腺癌细胞系14-3-3θ的表达水平存在差异,这可能与乳腺癌细胞的恶性程度相关,有待进一步研究。2.14-3-3ζ可以促进乳腺癌细胞的恶性生物学行为。3.14-3-3θ表达升高可以在一定程度上降低乳腺癌细胞对阿霉素、他莫昔芬及赫赛汀抗治疗的敏感性,其中赫赛汀最为明显,14-3-3ζ这一作用机制可能与Akt-m TOR通路的活化增加有关。
【关键词】：14-3-3θ 乳腺癌 耐药性 恶性生物学
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文献回顾15-21
• 1 14-3-3 蛋白的分子结构15-17
• 2 14-3-3 蛋白的生物学功能17
• 3 14-3-3 与肿瘤17-21
• 实验一 14-3-3θ 基因过表达载体的构建及其过表达乳腺癌细胞株的建立21-33
• 引言21-22
• 1 材料22-23
• 2 方法23-27
• 3 结果27-31
• 4 讨论31-33
• 实验二 14-3-3θ 过表达对乳腺癌恶性生物学行为的影响33-50
• 引言33-34
• 1 材料34-35
• 2 方法35-39
• 3 结果39-48
• 4 讨论48-50
• 实验三 初探 14-3-3θ 表达升高引起乳腺癌细胞对赫赛汀敏感性降低的分子机制50-59
• 引言50-51
• 1 材料51-52
• 2 方法52-55
• 3 结果55-57
• 4 讨论57-59
• 全文总结59-61
• 1. 14-3-3θ 基因过表达载体的构建及其过表达乳腺癌细胞株的建立。59
• 2. 14-3-3θ 过表达对乳腺癌恶性生物学行为的影响59
• 3. 初探 14-3-3θ表达升高引起乳腺癌细胞对赫赛汀敏感性降低的分子机制59-61
• 参考文献61-68
• 个人简历和研究成果68-69
• 致谢69

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1 黄啸原;用“印度阅兵”形容乳腺癌合适吗?[J];诊断病理学杂志;2001年02期

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3 张维彬,汪波,石灵春;中医药在现代乳腺癌治疗中的运用[J];中国中西医结合急救杂志;2002年01期

4 薛志勇;食物与乳腺癌[J];山东食品科技;2002年04期

5 王旬果,王建军,郑国华;乳腺癌相关标志物的研究进展[J];山东医药;2002年33期

6 陆尚闻;;男人也患乳腺癌[J];环境;2003年12期

7 ;新技术清晰拍摄早期乳腺癌细胞[J];上海生物医学工程;2005年04期

8 田富国;郭向阳;张华一;;乳腺癌诊治研究新进展[J];肿瘤研究与临床;2005年S1期

9 马涛,谷俊朝;血管内皮生长因子与乳腺癌的临床研究进展[J];国外医学(外科学分册);2005年01期

10 郭庆良,谷俊朝;乳腺癌和瘦素相关性研究进展[J];国外医学.外科学分册;2005年03期

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1 于永利;;抗乳腺癌免疫治疗融合蛋白[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

2 郭红飞;;中医治疗乳腺癌的策略[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 庞朋沙;伍会健;;乳腺癌治疗靶标的研究进展[A];北方遗传资源的保护与利用研讨会论文汇编[C];2010年

4 陆劲松;邵志敏;吴炅;韩企夏;沈镇宙;;新型维甲酸抑制乳腺癌细胞的生长及诱导凋亡的机制研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

5 刘爱国;胡冰;;乳腺癌临床治疗进展[A];安徽省抗癌协会第四次代表大会暨乳腺癌、肺癌专业委员会成立会议、安徽省肿瘤防治进展学术研讨会论文汇编[C];2001年

6 张嘉庆;王殊;乔新民;;乳腺癌的现状和远景[A];第一届全国中西医结合乳腺疾病学术会议论文汇编[C];2002年

7 刘清俊;;乳腺癌综合治疗的新进展[A];山西省抗癌协会第六届肿瘤学术交流会论文汇编[C];2003年

8 邵志敏;;21世纪乳腺癌治疗的展望[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年

9 陈松旺;张明;;乳腺癌治疗的回顾与展望[A];西部地区肿瘤学学术会议论文汇编[C];2004年

10 白霞;傅建新;丁凯阳;王兆钺;阮长耿;;组织因子途径抑制物-2在乳腺癌细胞中的表达研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

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1 ;血检有望揭示乳腺癌治疗效果[N];医药经济报;2004年

2 记者 郑晓春;乳腺癌细胞扩散基因被找到[N];科技日报;2007年

3 中国军事医学科学院肿瘤中心主任 宋三泰;乳腺癌有了新疗法[N];中国妇女报;2002年

4 王艳红;抑制ＤＮＡ修补可消灭乳腺癌细胞[N];医药经济报;2005年

5 詹建;乳腺癌饮食 两个时期不一样[N];中国中医药报;2006年

6 辛君;乳腺癌扩散基因“浮出水面”[N];大众卫生报;2009年

7 记者 毛黎;美发现有效抑制乳腺癌细胞生长的分子[N];科技日报;2010年

8 记者 吴春燕　通讯员 王丽霞;乳腺癌治疗将有新途径[N];光明日报;2011年

9 王乐　沈基飞;我科学家发现导致乳腺癌耐药的新标志物[N];科技日报;2011年

10 刘霞;一种天然分子能阻止乳腺癌恶化[N];科技日报;2011年

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1 柴红燕;疾病状态下CYP4Z1和4A的生物学行为及其药物干预研究[D];武汉大学;2012年

2 李凯;ID(inhibitor of DNA binding)家族蛋白调控乳腺细胞的分化并影响乳腺癌的预后[D];复旦大学;2014年

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本文编号：620631