miR-20a调控NFκB对胃癌细胞耐药性的影响及相关机制的研究

发布时间：2017-08-05 11:26

  本文关键词：miR-20a调控NFκB对胃癌细胞耐药性的影响及相关机制的研究

  更多相关文章： miR-20a NFκB NFKBIB 顺铂耐药

【摘要】：目的：miRNA的异常表达与肿瘤耐药密切相关,NFκB持续激活也是肿瘤化疗耐药的重要机制。本研究旨在探索miR-20a对NFκB的作用关系,力图阐明miR-20a在调控胃癌耐药中的作用及内在机制。方法：运用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaetion, RT-PCR)检测miR-20a在胃癌患者血浆及组织样本、胃癌耐药患者血浆及组织样本、胃癌耐药细胞株中的表达水平。MTT药敏试验法检测各组细胞转染前后对化疗药物的敏感性。流式细胞术检测各组细胞转染后对化疗药物诱导凋亡的变化。免疫组化检测胃癌组织中NFKBIB表达水平。运用荧光素酶报告实验验证miR-20a的靶基因。Western blot检测各组细胞转染前后NFKBIB、核内p65、Livin及Survivin分子的表达变化。结果：与正常人群血浆及正常胃组织样本相比,miR-20a;在胃癌血浆、组织样本中表达水平明显增高。此外,miR-20a在胃癌耐药患者的血浆、组织样本和细胞株SGC7901/DDP中的表达水平呈进一步升高。在转染miR-20a抑制物组,胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP对顺铂的敏感性和顺铂诱导的凋亡增强；在转染miR-20a模拟物组,胃癌母代细胞株SGC7901对顺铂的敏感性和顺铂诱导的凋亡降低。miR-20a高表达伴随着NFKBIB (IκBP)蛋白低表达,核内p65、Livin和Survivin蛋白高表达。荧光素酶实验结果显示NFKBIB是miR-20a的靶基因。SGC7901/DDP细胞中敲低miR-20a表达能上调NFKBIB表达水平,下调核内p65、Livin和Survivin的表达水平。相反地,异位表达的miR-20a能显著下调SGC7901细胞株中NFKBIB的表达水平,上调核内p65、Livin和Survivin蛋白的表达。结论：miR-20a可通过靶向调控NFKBIB的表达,激活NFκB并影响下游抗凋亡蛋白Livin和Survivin的表达从而导致胃癌细胞对顺铂耐药。
【关键词】：miR-20a NFκB NFKBIB 顺铂耐药
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-13
• 参考文献10-13
• 第一部分：miR-20a在胃癌患者血浆及组织、胃癌耐药患者血浆及组织、胃癌耐药细胞株中的表达13-25
• 1. 材料与仪器13-16
• 2. 实验方法16-23
• 3. 实验结果23-25
• 第二部分：miR-20a对胃癌细胞生物学行为及耐药表型的影响25-33
• 1. 实验材料与仪器25-27
• 2. 实验方法27-30
• 3. 实验结果30-33
• 第三部分：miR20a调控胃癌细胞生物学行为及耐药表型的分子机制33-45
• 1. 实验材料与仪器33-34
• 2. 实验方法34-40
• 3. 实验结果40-45
• 讨论45-48
• 参考文献48-52
• 文献综述52-72
• 参考文献61-72
• 英文缩略词表72-73
• 攻读学位期间发表文章情况73-74
• 致谢74

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本文编号：624650