PITX2、β-catenin在卵巢上皮性癌中的表达及意义

发布时间：2017-08-05 19:38

  本文关键词：PITX2、β-catenin在卵巢上皮性癌中的表达及意义

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【摘要】：卵巢上皮性癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一,死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢深居盆腔,卵巢上皮性癌起病比较隐匿,由于缺乏早期诊断方法,70%~80%已属晚期,极易发生转移和扩散,然而即使完善的肿瘤减灭术之后,病人的复发转移率仍很高,五年存活率仍徘徊在30%-40%左右。卵巢上皮性癌已成为严重威胁妇女生命的恶性肿瘤。PITX2全称为“垂体同型框2”(pituitary homeobox 2),定位于染色体4q25-26,是同型框基因bicoid相关家族的一员,因最初发现在垂体发育中发挥作用而得名,在脊椎动物的垂体、大脑、心脏、牙齿等发育过程中起到重要作用。近几年研究发现,PITX2基因突变可能与多种疾病有关,如:里格尔综合征(axenfeld-Riegersyndrome)、虹膜发育不全(iridogoniodysgenesis syndrome)和零星彼得综合征(sporadic Peter syndrome)等,但是越来越多的资料表明PITX2的异常激活与多种肿瘤的发生发展有关,例如:大肠癌、前列腺癌、乳腺癌、甲状腺瘤等。既往大量研究显示Wnt信号通路在卵巢癌的发生发展过程中起重要作用。2002年Kioussi等在垂体腺瘤中研究表明当Wnt信号通路被激活时,Wnt蛋白与细胞表面Fz受体以及共同受体结合后,从而抑制β-catenin-Axin-APC-GSK-3β复合物的形成,使GSK-3β失活,β-catenin不能被GSK-3β磷酸化而不被降解,逐渐积聚进入细胞核,与转录因子TCF/LEF相结合,启动转录相应的下游靶基因PITX2,从而促进PITX2下游靶基因如C-myc、Cyclin D1、Cyclin D2等的表达,促进细胞的异常增殖或活化,最终促进肿瘤的发生。PITX2是Wnt信号通路的下游基因,并受Wnt/Dvl/β-catenin的调节,但是在卵巢上皮性癌中PITX2异常激活是否与Wnt/β-catenin信号通路有关仍不清楚。目的本研究通过从组织水平和细胞水平上对PITX2和β-catenin进行研究,探讨PITX2与卵巢上皮性癌的发生发展之间的关系以及PITX2在卵巢上皮性癌中异常高表达是否受Wnt/β-catenin调控。材料和方法1.研究对象:1.1临床标本收集2012年9月-2014年12月在郑州大学第三附属医院、第一附属医院的手术标本114例,患者年龄16岁到70岁,中位年龄54岁,根据组织的良恶程度将标本分为3组:卵巢上皮性癌42例(恶性组);卵巢上皮性良性肿瘤37例(良性组),正常卵巢组织35例(正常组);组织标本经10%甲醛固定,石蜡包埋。42例卵巢上皮性癌患者、37例卵巢上皮良性肿瘤、35例非卵巢肿瘤患者血清标本,采血时间均为早上6点到8点,室温下血液静置20min,4℃下3000r/min离心20min,取上清置于EP管,-80℃冰箱保存。所有病例均未合并其他肿瘤病史,术前、术后均未接受放、化疗,取材前均与患者及家属沟通并获得其知情同意,术后均经病理科确诊。1.2细胞株SKOV3、OVCAR3两株细胞来自于美国ATCC,两细胞株培养均使用1640培养基(含10%灭火胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/L链霉素),在37.5℃、5%CO2培养箱中培养,当细胞进入对数期后分别加入Wnt通路抑制剂DKK130 ng/ml。细胞分组:SKOV3空白对照组、SKOV3+DKK1抑制剂组、OVCAR3空白对照组、OVCAR3+DKK1抑制剂组。2.研究方法:a.运用免疫组织化学SP法、实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法分别检测不同卵巢组织中PITX2和β-catenin蛋白和m RNA的表达。b.运用Elisa法检测不同卵巢疾病患者血清中PITX2蛋白的表达。c.运用MTT法和细胞划痕实验检测SKOV3、OVCAR3两株细胞在加入Wnt通路抑制剂DKK1前后细胞的增殖能力和迁移能力。d.运用Q-PCR和Western bolt分别检测SKOV3、OVCAR3两株细胞在加入Wnt通路抑制剂DKK1前后PITX2和β-catenin蛋白和m RNA的表达。3.统计学方法:采用统计软件SPSS17.0进行数据分析。应用卡方检验比较正常组、良性组、恶性组中PITX2和β-catenin蛋白的阳性表达率以及两种蛋白在恶性组中与临床病理参数之间的关系。在正常组、良性组、恶性组中PITX2和β-catenin m RNA的表达水平采用单因素方差进行分析,组与组之间两两比较采用LSD-t法。应用Pearson列联系数进行分析在卵巢上皮性癌组织中PITX2和β-catenin蛋白表达的相关性。两独立样本均数之间比较采用t检验。检验水准采用α=0.05,组间两两比较时检验水准采用α′=α/比较次数=0.0167。结果1.根据组织免疫化学染色结果PITX2蛋白阳性表达位于细胞质。PITX2蛋白在正常组中,良性组中以及恶性组中的阳性表达率分别为14.3%(5/35)、16.2%(6/37)、83.3%(35/42),其中恶性组中的阳性表达率明显高于正常组和良性组(P0.0167),正常组与良性组相比无明显差异(P0.0167)。2.卵巢上皮性癌组织中,PITX2蛋白表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期、组织分化程度以及淋巴结有无转移有关(P0.05);与患者年龄无关(P0.05)。3.PITX2蛋白在正常组、良性组、恶性组患者血清中的表达量分别为7.25±2.24ng.m L-1、7.83±1.9ng.m L-1、12.18±2.38ng.m L-1,恶性组患者血清中PITX2蛋白的表达量明显高于良性组和正常组,差异具有统计学意义(P0.01),正常组与良性组之间无明显差异(P0.05)。4.PITX2 m RNA在正常组、良性组、恶性组中的相对表达量分别为0.128±0.087、0.167±0.106、0.405±0.126,恶性组中PITX2的m RNA相对表达量明显高于正常组和良性组(P0.001),但正常组与良性组之间无明显差异(P0.05)。5.根据组织免疫化学染色结果β-catenin蛋白阳性异位表达于细胞质。β-catenin蛋白在正常组、良性组、恶性组中的阳性表达率分别为5.7%(2/35)、10.8%(4/37)、85.7%(36/42),恶性组中的阳性表达率明显高于正常组和良性组(P0.0167),正常组与良性组相比无明显差异(P0.0167)。6.卵巢上皮性癌组织中,β-catenin蛋白的异位表达与卵巢上皮性癌的FIGO分期、组织分化程度以及淋巴结有无转移有关(P0.05);与患者年龄无关(P0.05)。7.β-catenin m RNA在正常组、良性组、恶性组中的相对表达量分别为0.110±0.082、0.132±0.095、0.286±0.106,恶性组中β-catenin的m RNA相对表达量明显高于正常组和良性组(P0.001),但正常组与良性组之间无明显差异(P0.05)。8.卵巢上皮性癌组织中,PITX2蛋白表达和β-catenin蛋白的异位表达具有相关性,并且两者之间呈正相关关系(rp=0.548,P=0.003)。9.细胞实验中当在SKOV3、OVCAR3细胞株中分别加入Wnt通路抑制剂DKK1 30ng/ml时,细胞增殖能力和迁移能力均下降(P0.05)。10.细胞实验中当在SKOV3、OVCAR3细胞株中分别加入Wnt通路抑制剂DKK1 30ng/ml时,PITX2、β-catenin m RNA和蛋白质均下降(P0.05)。结论1.PITX2和β-catenin在卵巢上皮性癌中异常高表达,并与卵巢上皮性癌的FIGO分期、组织分化程度以及淋巴结有无转移有关,并且两者呈正相关,说明PITX2和β-catenin可能协同参与了卵巢上皮性癌的发生发展。2.PITX2蛋白在卵巢上皮性癌患者血清中高表达,提示PITX2可能作为卵巢上皮性癌患者早期诊断、评估病情进展的有效指标。3.当Wnt/β-catenin信号通路受到抑制时,PITX2表达量明显下降,细胞的增殖能力和迁移能力均下降,说明PITX2可能做为Wnt/β-catenin信号通路的下游靶基因,参与卵巢上皮性癌的发生及发展过程。
【关键词】：卵巢上皮性癌 PITX2 β-catenin
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要4-8
• abstract8-14
• 中英文缩略词14-15
• 引言15-17
• 材料与方法17-31
• 实验结果31-37
• 讨论37-43
• 结论43-44
• 附图44-50
• 参考文献50-54
• 综述 转录因子PITX2 的研究进展54-70
• 参考文献64-70
• 个人简历及在读期间发表的论文70-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：626627