VitK3联合吡柔比星抑制人膀胱癌BIU-87细胞株的实验分析与PTEN基因蛋白表达的相关性研究

发布时间：2017-08-08 01:08

  本文关键词：VitK3联合吡柔比星抑制人膀胱癌BIU-87细胞株的实验分析与PTEN基因蛋白表达的相关性研究

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【摘要】：背景:膀胱癌(Bladder cancer)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,也是全身十大常见肿瘤之一,其发病率在我国呈逐年升高趋势。表浅性膀胱癌为膀胱癌的早期类型,常规行经尿道膀胱肿瘤切除术(TURBT术)后得到一定治疗,但单一手术复发率高,术后结合吡柔比星等药物进行规律膀胱灌注可以降低复发概率,表明吡柔比星联合治疗在治疗膀胱癌患者中具有协同作用。VitK3为人体肝脏合成原酶必需物质,参与相关凝血因子合成,具有利尿增加解毒功能,参与细胞膜性物质修复功能,同时近来国内外不少学者报道,维生素K3对某些肿瘤细胞系的增殖具有抑制作用,能够作用于细胞使其凋亡。近年来新发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN基因,它不仅表现出抑癌基因的特性,而且还具有磷酸酶活性,能够调节细胞的增殖和死亡,且在细胞的转移和粘连等方面有重要作用。林延峰[44]等在对膀胱癌组织切片进行检测后发现,70例癌切片的PTEN表达阳性率是39%,与之相对应的癌旁组织中,PTEN的阳性表达率为100%。张建华等[45]同样也是用免疫组化的方法来检测PTEN蛋白的表达,结果显示癌组织中的阳性率有53.2%,其良性病变中表达阳性率百分之百。诸多学者的研究都显示了抑癌基因PTEN与膀胱癌的发生发展有着紧密联系,研究PTEN对于深入了解其作用机制和为基因诊疗奠定理论基础。虽然膀胱癌的治疗取得了一定进展,但术后患者出现的高复发率成为膀胱癌临床治疗方面面临的重大难题之一,因此探索VitK3联合吡柔比星增强其抑癌率以及探索PTEN基因的表达在吡柔比星及其联合治疗中产生的作用成为了如今研究的一个重要方面。目的:研究VitK3联合吡柔比星对于上皮癌细胞BIU-87的影响,并分析与PTEN基因表达相关性,为临床上膀胱联合灌注及膀胱相关基因表达调控提供了依据。方法:培养人膀胱癌细胞BIU-87;使用MTT(噻唑蓝)法分别筛选出吡柔比星和Vitamin K3作用于BIU-87细胞3天后的最宜用药浓度;设立空白对照组,吡柔比星作用组,Vitamin K3作用组、联合用药组,MTT法检测各组细胞存活率;采用流式细胞仪观察人膀胱癌BIU-87细胞培养株的凋亡情况,通过流式软件分析细胞周期变化;通过Q-PCR实验分析各个实验组中人膀胱癌BIU-87细胞PTEN基因表达;通过Western blot实验检测各个实验组BIU-87细胞中PTEN蛋白的表达;结果:吡柔比星药物浓度在1mg/L到100mg/L浓度范围中可以有效抑制BIU-87细胞的增殖(P0.05);Vitamin K3药物浓度在5 umol/L到20 umol/L的浓度范围里可以有效抑制BIU-87细胞的增殖(P0.05);Vitamin K3联合吡柔比星用药抑制对于BIU-87细胞的增殖效果更好(P0.05);采用吡柔比星1mg/L浓度干预BIU-87细胞可以促进其发生凋亡(P0.05),使得其细胞周期阻滞于G2/M期(P0.05),采用Vitamin K3 5 umol/L浓度干预BIU-87细胞可以促进其发生凋亡(P0.05),但其细胞周期与阴性对照组相比较无显著差异(P0.05),Vitamin K3联合吡柔比星干预BIU-87细胞可以使其发生更多凋亡(P0.05),使得BIU-87细胞周期阻滞于G2/M期(P0.05);采用吡柔比星1mg/L浓度干预BIU-87细胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表达水平(P0.05),采用Vitamin K35 umol/L浓度干预BIU-87细胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表达水平(P0.05),Vitamin K3联合吡柔比星干预BIU-87细胞可以更多提高PTEN的m RNA和蛋白的表达水平(P0.05);结论:一定浓度的Vitamin K3联合吡柔比星作用可以显著抑制人膀胱癌细胞BIU-87的增殖,提高PTEN的表达水平,促使BIU-87细胞发生凋亡并将其细胞周期阻滞于G2/M期。
【关键词】：PTEN 膀胱癌 VitK3 吡柔比星
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 英文缩写词表5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-13
• 引言13-15
• 第一章 材料与方法15-33
• 第二章 实验结果33-43
• 第三章 讨论43-49
• 第四章 结论与展望49-51
• 参考文献51-56
• 综述 膀胱癌的肿瘤分子标记物及其应用展望56-69
• 参考文献63-69
• 成果目录69-71
• 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：637538