胃癌中miR-106b-25的表达及生物学行为特征的研究

发布时间：2017-08-10 04:17

  本文关键词：胃癌中miR-106b-25的表达及生物学行为特征的研究

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【摘要】：目的:研究miRNA-106b-25基因簇在胃癌组织中表达及其与胃癌患者临床病理特征的关系。同时,在胃癌细胞系中检测miRNA-106b-25的表达水平,利用瞬时转染技术在体外实验中抑制miRNA-106b-25的表达,并探究低miRNA-106b-25表达水平对胃癌细胞系生物学行为特征的影响。方法:1、采用qRT-PCR方法检测90例胃癌患者癌组织以及癌旁正常胃粘膜组织中miRNA-106b-25的相对表达量。收集天津医科大学肿瘤医院2013年3月至2013年9月收治的90例胃癌患者的临床病理资料,分析miRNA-106b-25在胃癌患者的原癌组织及其癌旁正常胃粘膜组织中的表达差异。同时查阅所有入组患者的临床病理特征,进一步分析mi RNA-106b-25与临床病理特征的相关性。2、采用qRT-PCR方法检测胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823以及胃粘膜正常细胞系GES-1中miRNA-106b-25的表达水平。同时,以lipo2000作为转染媒介,向胃癌细胞系中瞬时转染人工合成miRNA-106b-25抑制剂(miRNA inhibitor),分别通过荧光显微镜下观察和qRT-PCR方法检测转染效率,选择抑制效果最好的胃癌细胞系作为进一步细胞功能研究的实验对象。3、采用划痕实验观察胃癌细胞迁移能力,生长曲线和MTT法观察胃癌细胞增殖的变化以及miRNA inhibitor对细胞生长的抑制情况,PI单染法及Annexin V/PI双染法检测细胞周期及凋亡的变化,Transwell细胞迁徙实验检测细胞侵袭能力的改变。结果:1、胃癌患者miRNA-106b-25在癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常胃粘膜组织,差异有统计学意义。miRNA-106b和miRNA-93相对表达倍数与肿瘤大小、浆膜累犯、脉管癌栓、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和TNM分期显著相关,差异具有统计学意义;miRNA-25相对表达倍数则仅与浆膜累犯、脉管癌栓、浸润深度、淋巴结转移显著相关。2、MiRNA-106b、miRNA-93、miRNA-25在胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823表达量均高于胃粘膜正常细胞系GES-1。MGC-803相较于另外两种胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823),外源性mi RNA inhibitor对mi RNA-106b-25的抑制靶向性较高,即选择MGC-803作为细胞功能研究的实验对象。3、在胃癌细胞系MGC-803中瞬时转染人工合成的miRNA inhibitor后,通过划痕实验、Transwell实验表明转染后MGC-803细胞迁移、侵袭能力显著下降;MTT实验、细胞生长计数表明转染后MGC-803细胞的生长受到显著抑制;Annexin V/PI法表明转染后MGC-803细胞凋亡增加。结论:1、胃癌组织中miRNA-106b-25基因簇过表达,并且该簇miRNA的表达与胃癌中与预后密切相关的临床病理特征有关,提示其表达量可作为反映胃癌的进展程度重要临床指标。2、相对于正常胃粘膜细胞,miRNA-106b-25基因簇在胃癌细胞系中均过表达;并通过外源性抑制其表达后,胃癌细胞的多项生物学行为均受到显著抑制,提示其可能作用于胃癌发生发展过程中的关键部位,为进一步探究并寻找其在胃癌治疗中关键分子靶点奠定坚实基础。
【关键词】：胃癌 miR-106b-25临床病理因素 MGC-803胃癌细胞 生物学特征
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-15
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、胃癌组织中miRNA-106b-25的表达15-32
• 1.1 对象和方法15-19
• 1.1.1 对象15
• 1.1.2 材料与试剂15-16
• 1.1.3 溶液配制16
• 1.1.4 主要仪器16
• 1.1.5 实验方法16-19
• 1.1.6 统计学处理19
• 1.2 结果19-30
• 1.2.1 胃癌组织与其癌旁正常胃粘膜组织中miRNA-106b-25的表达差异19-20
• 1.2.2 胃癌组织miRNA-106b-25的表达与临床病理特征的关系20-30
• 1.3 讨论30-31
• 1.4 小结31-32
• 二、miR-106b-25在胃癌细胞系中表达的研究32-39
• 2.1 对象和方法32-34
• 2.1.1 细胞系32
• 2.1.2 相关试剂与材料32
• 2.1.3 主要仪器32
• 2.1.4 实验方法32-34
• 2.1.5 统计学处理34
• 2.2 结果34-36
• 2.2.1 胃癌细胞系中miRNA-106b-25的表达34
• 2.2.2 瞬时转染反义抑制剂筛选降表达效果最佳的胃癌细胞系34-36
• 2.3 讨论36-38
• 2.4 小结38-39
• 三、反义抑制miR-106b-25对胃癌细胞生物学行为的影响39-51
• 3.1 对象和方法39-43
• 3.1.1 对象39
• 3.1.2 方法39-43
• 3.1.3 统计学处理43
• 3.2 结果43-49
• 3.2.1 划痕实验观察转染后细胞迁移能力的变化43-44
• 3.2.2 MTT（噻唑兰比色分析）检测转染抑制效果44-45
• 3.2.3 细胞生长计数45-46
• 3.2.4 Transwell实验检测细胞侵袭能力46-47
• 3.2.5 流式细胞术检测细胞周期47-48
• 3.2.6 流式细胞术检测细胞凋亡48-49
• 3.3 讨论49-50
• 3.4 小结50-51
• 结论51-52
• 参考文献52-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 附录57-59
• 综述 microRNA-106b-25在胃癌中的研究进展59-71
• 综述参考文献66-71
• 致谢71

【共引文献】

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本文编号：648788