TF10促进糖代谢及乳腺癌细胞增殖的相关研究

发布时间：2017-08-11 04:00

  本文关键词：TF10促进糖代谢及乳腺癌细胞增殖的相关研究

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【摘要】：目的：糖代谢异常在肿瘤发生发展中具有重要作用。转录因子TF10过表达时,可引起多种肿瘤的发生,促进其转移和浸润等,导致不良预后。目前对TF10在肿瘤细胞糖代谢方面的作用还未报道。我们通过基因芯片技术探索TF10能否调控乳腺癌细胞糖代谢并研究其调控机制。同时探索TF10能否通过糖代谢途径来调控乳腺癌细胞的增殖,明确TF10在乳腺癌中的表达情况。方法：1、运用基因芯片技术,明确TF10是否参与糖代谢途径的调控；2、通过启动子活性检测、CHIP实验、糖代谢产物检测等,探索TF10调控糖代谢途径的机制：3、乳腺癌细胞过表达TF10后,分别经过2-DG抑制糖代谢和敲低LDHA表达处理,通过检测细胞生长曲线,观察TF10能否通过糖代谢途径来调控乳腺癌细胞的增殖；4、通过免疫组化染色实验,明确TF10在乳腺癌中的表达情况。结果：1、基因芯片差异功能聚类分析显示,TF10对乳腺癌细胞糖代谢具有促进作用，，可促进PFKL、PKM2、LDHA的转录表达；2、TF10可促进PFKL、PKM2、 LDHA的启动子活性,并可直接募集到三者的启动子上,同时,TF10可促进乳腺癌细胞摄取葡萄糖,促进丙酮酸、乳酸的生成；3、TF10可通过促进糖代谢途径来乳腺癌细胞的增殖，并且依赖于LDHA的表达；4、TF10在乳腺癌组织较癌旁组织高表达,并且与PKM2、LDHA的表达成正相关。结论：我们首次发现TF10与糖代谢密切相关,可通过促进PFKL、PKM2、LDHA的转录表达来进行。并且TF10可通过促进糖代谢来促进乳腺癌细胞的增殖。这一发现开拓了TF10的功能研究,为TF10促癌生长的机制研究提供了新视角,有待我们继续深入研究。
【关键词】：TF10 乳腺癌 糖代谢
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 缩略词表6-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-20
• 1. 材料12-13
• 1.1 细胞株与菌株12
• 1.2 质粒12
• 1.3 常用分子生物学试剂12
• 1.4 细胞培养试剂12-13
• 1.5 主要实验仪器13
• 2. 方法13-20
• 2.1 细胞培养13
• 2.2 重组质粒构建与鉴定13-14
• 2.3 真核细胞的转染14
• 2.4 免疫共沉淀实验(IP实验)14-15
• 2.5 实时荧光定量(Real-Time)RT-PCR15
• 2.6 启动子活性分析实验15-16
• 2.7 慢病毒包装16
• 2.8 细胞稳定克隆的制备16
• 2.9 转染小干扰RNA即siRNA16-17
• 2.10 染色质免疫共沉淀(CHIP)17
• 2.11 葡萄糖消耗测定17-18
• 2.12 丙酮酸含量测定18
• 2.13 乳酸含量测定18
• 2.14 细胞生长曲线分析18
• 2.15 免疫组织化学18-19
• 2.16 免疫组化染色、评分、相关性分析19
• 2.17 统计分析19-20
• 结果20-28
• 1. TF10调控乳腺癌细胞糖代谢的基因筛选20-22
• 1.1 TF10基因外源低表达乳腺癌细胞模型的建立20-21
• 1.2 基因芯片差异功能聚类分析21-22
• 2. TF10促进PFKL、PKM2、LDHA的mRNA水平表达22-25
• 2.1 TF10促进PFKL、PKM2、LDHA的启动子活性22-23
• 2.2 TF10可募集到PFKL、PKM2、LDHA启动子上23-24
• 2.3 TF10调控乳腺癌细胞糖代谢的代谢产物24-25
• 3. TF10促进乳腺癌细胞的增殖25-27
• 3.1 TF10可通过促进糖代谢过程来促进乳腺癌细胞增殖25-26
• 3.2 TF10促进乳腺癌细胞的增殖依赖于LDHA的表达26-27
• 4. TF10在乳腺癌组织中的表达情况27-28
• 4.1 TF10在乳腺癌组织中较癌旁组织高表达27
• 4.2 TF10与PKM2、LDHA在乳腺癌组织中呈正相关27-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 文献综述35-44
• 参考文献40-44
• 发表文章44-45
• 致谢45

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本文编号：654062