MiR-27a在胶质瘤的表达及其恶性表型体外研究

发布时间：2017-08-11 17:36

  本文关键词：MiR-27a在胶质瘤的表达及其恶性表型体外研究

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【摘要】：背景 脑胶质瘤是临床上常见的颅内原发性肿瘤。虽然恶性胶质瘤的治疗包括首选手术切除治疗,辅助放化疗,生物治疗及综合治疗等治疗手段,但是预后仍然很差。恶性胶质瘤大多在确诊后一年左右死亡。高级别胶质瘤细胞是高度异质性的肿瘤,因此认为其是有多种基因突变或表观遗传学变化导致的大量信号通路的失调控引起的,其中Wnt/beta-catenin信号通路及其上游调控miRNA的作用,在胶质瘤的发生、发展、演变及预后中越来越受到关注。 Wnt/beta-catenin信号通路与多种疾病的病理过程有关,尤其是胶质瘤的发生。该信号通路通过beta-catenin和TCF/LEF-1复合物激活下游靶点来调节多种生物学过程。Wnt蛋白稳定胞浆beta-catenin,使其与TCF/LEF-1在核内结合,募集转录因子Brgl和CREB结合蛋白,启动Wnt信号通路靶基因表达。 SFRP1是Wnt/beta-catenin信号通路抑制因子,在体外的恶性肿瘤细胞株中的研究发现它可以通过促进肿瘤细胞的凋亡而起到抑癌作用,故可以初步设定SFRP1是一个胶质瘤抑癌基因。此外,为了寻找SFRP1上游调控miRNA,我们搜索了包括TARGETSCAN, MIRANDA等预测miRNA靶基因网站,发现有很多的miRNA,包括miR-27a在SFRP1mRNA3'UTR上有潜在的结合位点,故本课题重点研究下调miR-27a抑制胶质瘤细胞增殖、凋亡、周期和侵袭迁移的影响及其可能的作用机制。 方法 应用qRT-PCR的方法,检测5个胶质瘤细胞系和8例高级别脑胶质瘤组织中miR-27a的表达水平；将niR-27a inhibitor转染至人脑胶质瘤细胞系LN229和U251中；采用qRT-PCR检测转染后胶质瘤细胞系的miR-27a表达水平以鉴定抑制效果；MTS(四唑盐)实验评价细胞的增殖率；Propidium staining法检测细胞周期变化；Annexin V法检测细胞凋亡；Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力变化；Western blots检测细胞生物学行为相关蛋白的表达；荧光素酶实验验证miR-27a直接靶向SFRP1,调控其表达。 结果 MiR-27a在胶质瘤组织和细胞系中的表达较正常组织明显上调；qRT-PCR检测结果显示转染后MiR-27a Inhibitor组较Negative Control组表达下降,MiR-27a Inhibitor组细胞增殖活性降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡增加,细胞侵袭迁移能力受到抑制。Western blots提示细胞生物学行为相关蛋白PCNA、Bcl2、 CyclinDl及MMP-9表达在转染组均有减少。该实验说明miR-27a在高级别胶质瘤中是癌微RNA (OncomiRs),直接靶向SFRP1,调控其表达,可能成为高级别胶质瘤治疗新的潜在靶点。 结论 MiR-27a在胶质瘤组织和细胞系中的表达上调；转染后MiR-27a Inhibitor组miR-27a表达下降,细胞增殖活性降低,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡增加,细胞侵袭迁移能力受到抑制。该实验说明miR-27a在高级别胶质瘤是癌微RNA(OncomiRs),可能成为高级别胶质瘤治疗新的候选靶点。这是首次有关miR-27a在人脑胶质瘤中的表达以及对胶质瘤恶性表型的影响的研究报道,为进一步认识脑胶质瘤的分子病理机制及新一类的靶向治疗提供实验依据。
【关键词】：胶质瘤 miRNA-27a 恶性表型
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 目录11-12
• 1 前言12-15
• 2 材料与方法15-25
• 3 结果25-40
• 4 讨论40-43
• 结论43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-60
• 参考文献55-60
• 作者简介及在读期间所取得的科研成果60-61

【共引文献】

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本文编号：657406