3-BrPA逆转肺腺癌细胞的耐药性研究

发布时间：2017-08-11 20:02

  本文关键词：3-BrPA逆转肺腺癌细胞的耐药性研究

  更多相关文章： 3-BrPA 顺铂 A549/DDP细胞 耐药逆转

【摘要】：背景癌症这一难以治愈的疾病无论在发达还是发展中国家都会给社会带来沉重的经济负担。在环境污染及吸烟等因素的作用下,肺癌几乎已经成为男性癌症患者的主要死因,并且在发达国家的女性人群中,其病死率已经超越乳腺癌跃居恶性肿瘤榜首[1]。众所周知,手术切除病灶是肺癌最有效的治疗手段,但是临床上绝大多数患者明确诊断时分期已经偏晚,失去了手术切除病灶的机会,故针对肺癌患者行之有效的治疗方式为化疗治疗[2]。包含铂类药物的治疗方案是晚期肺癌化疗的标准模式,然而这些方案的治疗效果并不令人满意,其主要原因是顺铂在临床运用过程中所产生的耐药性。顺铂耐药后,多药耐药蛋白P-gp等表达相应增加,改变顺铂排出和摄取,从而降低细胞中含量,使其不能达到有效浓度[3]。20世纪,Warburg O等[4-6]研究发现肿瘤细胞在氧气充足时仍是通过糖酵解的方式获得生存所需的能量,这一现象被称为瓦伯格效应(Warburg effect)[7]。XU RH、PELICANO H等[8]已经证实通过阻断肿瘤细胞的糖酵解过程从而抑制细胞生存所需的ATP能杀死多药耐药表型的肿瘤细胞,并且多药耐药细胞对3-BrPA这种糖酵解特异性抑制剂很敏感,3-BrPA能增强耐药细胞(HL-60/AR)对阿霉素、长春新碱、阿糖胞苷等化疗药物的敏感性。因此,3-BrPA作为一种糖酵解抑制剂,为肿瘤界逆转MDR的研究带来了一个新思路。本研究拟采用3-BrPA作为研究对象观察其对A549/DDP细胞是否具有耐逆转作用以及探讨可能的机制。目的探究3-BrPA对肺腺癌耐顺铂的A549/DDP细胞的逆转作用及其可能机制。方法1.采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测3-BrPA对A549/DDP细胞的增殖抑制作用,由此计算出3-BrPA的最佳耐药逆转浓度。2.采用CCK8法分别检测顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及A549/DDP细胞加入3-BrPA后的IC50(half maximal inhibitory concentration),并根据公式计算出耐药倍数、耐药逆转倍数及相对逆转效率。3.采用Western blot法检测P-gp分别在A549细胞、A549/DDP细胞以及3-BrPA作用后的A549/DDP细胞上的表达水平,由此观察3-BrPA对细胞膜P-gp表达的影响。4.采用流式细胞术检测不同浓度水平的3-BrPA作用于A549/DDP细胞后细胞内Rh123的平均荧光强度(MFI),由此观察3-BrPA对细胞膜P-gp功能的影响。结果1.3-BrPA对A549/DDP细胞的增殖具有抑制作用,并且呈时间-剂量依赖性,与对照组相比差异均具有统计学意义(P0.05),由此算出3-BrPA的最佳耐药逆转浓度5ug/ml。2.A549细胞及A549/DDP细胞的顺铂IC50分别为6.714ug/ml、38.99 ug/ml,3-BrPA作用后的A549/DDP细胞的顺铂IC50为12.86 ug/ml,由此计算得出A549/DDP细胞的耐药倍数为5.81。A549/DDP细胞对顺铂的耐药性被3-BrPA逆转了3.03倍,相对逆转效率为81%。3.Western blot检测结果显示存在P-gp过表达现象的A549/DDP细胞在加入3-BrPA后,P-gp表达较之前明显降低。4.流式细胞术结果示随着3-BrPA浓度的递增,作用后的A549/DDP细胞内平均荧光强度(MFI)亦随之递增。结论1.3-BrPA能以时间-剂量依赖性的方式抑制A549/DDP细胞的生长。2.3-BrPA能逆转顺铂对A549/DDP细胞产生的耐药性。3.抑制细胞膜表面P-gp表达、降低P-gp功能可能是3-BrPA逆转顺铂耐药性的机制。
【关键词】：3-BrPA 顺铂 A549/DDP细胞 耐药逆转
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 缩略词表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 3-BrPA对肺腺癌耐药细胞A549/DDP细胞的抑制作用14-20
• 2.1 材料与方法14-17
• 2.2 结果17-18
• 2.3 讨论18-20
• 第三章 3-BrPA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用20-25
• 3.1 材料与方法20-22
• 3.2 结果22-23
• 3.3 讨论23-25
• 第四章 3-BrPA逆转耐顺铂的肺腺癌细A549/DDP细胞耐药性的机制研究25-32
• 4.1 材料与方法25-29
• 4.2 结果29-30
• 4.3 讨论30-32
• 全文结论32-33
• 参考文献33-37
• 文献综述 3-BrPA的抗肿瘤作用研究37-46
• 参考文献42-46
• 攻读硕士期间发表的文章46-47
• 致谢47

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本文编号：657977