石蒜碱及盐酸石蒜碱对肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-08-11 21:06

  本文关键词：石蒜碱及盐酸石蒜碱对肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

  更多相关文章： 石蒜碱 盐酸石蒜碱 肺癌A549细胞 食管癌Eca-109细胞 细胞凋亡 细胞周期

【摘要】：恶性肿瘤是当前危害人类健康的严重疾病,抗肿瘤化学药物在杀灭癌细胞的同时,对人体正常细胞也产生了一定的毒副作用。因此,从天然植物中寻找和提炼高效低毒的抗肿瘤药物已逐渐成为近年来国内外学者的研究热点。关于石蒜科植物提取物石蒜碱及盐酸石蒜碱,研究报道其在白血病细胞(HL-60、K562),多发性骨髓瘤细胞(KM3),卵巢癌细胞(Hey1B),非激素依赖性前列腺癌细胞(PC-3M,DU145,LNCa P,22RV1)中,均有良好的抗肿瘤功效,但作用机制不尽相同。本文选取石蒜碱及盐酸石蒜碱,探讨其抑制肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞活性及诱导细胞凋亡的分子机制。本文开展了如下实验:(1)MTT法检测不同浓度(0,2.5,5.0,10.0,20.0μM)的石蒜碱和盐酸石蒜碱处理肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞24h和48h对细胞活性的影响。(2)荧光显微镜观察浓度为0,2.5,5.0,10.0,20.0μM的石蒜碱和盐酸石蒜碱处理A549细胞和Eca-109细胞24h后AO/PI染色下的形态变化。(3)流式细胞仪检测浓度为0,1.2,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后的细胞凋亡率。(4)流式细胞仪检测浓度为0,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后细胞周期的变化。(5)qRT-PCR检测石蒜碱和盐酸石蒜碱(0,10μM)处理24h后,肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞内凋亡相关基因(p53,Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9)在转录水平的变化。(6)Western blot检测浓度为0,0.5,1.0μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞6h后,基因p53,因Bcl-2,Caspase-9,Cyclin D1表达量的变化以及Akt,SAPK/JNK及GSK-3β蛋白磷酸化水平的变化。本文研究结果如下:(1)石蒜碱和盐酸石蒜碱对A549细胞和Eca-109细胞活性均有明显的抑制作用,并且呈时间剂量依赖关系。(2)在不同浓度石蒜碱和盐酸石蒜碱处理下,经AO/PI染色后荧光显微镜观察发现A549细胞和Eca-109细胞发出红色荧光,凋亡小体增多。(3)经浓度为0,1.2,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后,细胞凋亡率相应增高,并且呈剂量依赖关系。(4)浓度为0,2.4,4.8μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞24h后,细胞周期G1期细胞数目百分率明显上升,并且呈剂量依赖关系。(5)经石蒜碱和盐酸石蒜碱(10μM)处理24h后,肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞内凋亡相关基因p53、Bax、Caspase-3、Caspase-9的转录水平明显上调,而Bcl-2下调明显。(6)浓度为0,0.5,1.0μM的盐酸石蒜碱处理Eca-109细胞6h后,p53和Caspase-9蛋白表达量随药物浓度的增加而上升,Bcl-2和Cyclin D1蛋白表达量随药物浓度的增加而下降,SAPK/JNK和GSK-3β蛋白磷酸化水平随药物浓度增加而上升。综上所述,石蒜碱和盐酸石蒜碱可以抑制肺癌A549细胞和食管癌Eca-109细胞的细胞活性并诱导细胞凋亡。本文的研究结果为石蒜碱及盐酸石蒜碱日后开发为新型天然抗肿瘤的潜在性提供了理论基础。
【关键词】：石蒜碱 盐酸石蒜碱 肺癌A549细胞 食管癌Eca-109细胞 细胞凋亡 细胞周期
【学位授予单位】：西华师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 主要符号对照表10-11
• 第一章 前言11-24
• 1.1 肿瘤概述11-13
• 1.1.1 肿瘤的细胞构成11
• 1.1.2 肿瘤的抵抗11-12
• 1.1.3 肿瘤的转化12-13
• 1.1.4 肿瘤细胞的迁移13
• 1.2 肿瘤发病趋势及死亡率13-14
• 1.2.1 我国肺癌现状14
• 1.2.2 我国食管癌现状14
• 1.3 细胞凋亡与肿瘤的关系14-15
• 1.4 细胞周期与肿瘤的关系15-16
• 1.5 细胞程序性坏死与肿瘤的关系16-17
• 1.6 肿瘤研究的新方法学17-18
• 1.6.1 肿瘤细胞与动物模型的方法17
• 1.6.2 肿瘤微环境的研究方法17
• 1.6.3 肿瘤系统生物学的方法17-18
• 1.7 生物碱18-19
• 1.7.1 生物碱概述18
• 1.7.2 生物碱抗肿瘤功效研究概况18-19
• 1.7.2.1 苦参碱18
• 1.7.2.2 长春花碱18-19
• 1.7.2.3 喜树碱19
• 1.7.2.4 秋水仙碱19
• 1.7.2.5 三尖杉酯碱19
• 1.8 石蒜碱及盐酸石蒜碱19-22
• 1.8.1 石蒜碱及盐酸石蒜碱概述19-20
• 1.8.2 石蒜碱及盐酸石蒜碱抗肿瘤研究进展20-22
• 1.8.2.1 抗急性早幼粒细胞白血病细胞20-21
• 1.8.2.2 抗多发性骨髓瘤细胞21
• 1.8.2.3 抗慢性粒细胞性白血病细胞21-22
• 1.8.2.4 抗卵巢癌细胞22
• 1.8.2.5 抗激素非依赖性前列腺癌细胞22
• 1.9 本研究的目的与意义22-23
• 1.10 实验线路图23-24
• 第二章 实验材料与方法24-35
• 2.1 实验材料24
• 2.1.1 实验试剂24
• 2.1.2 实验仪器24
• 2.2 实验方法24-35
• 2.2.1 细胞培养24
• 2.2.2 MTT法检测细胞活性24-25
• 2.2.3 荧光染色观察细胞形态25
• 2.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡25-26
• 2.2.4.1 样品染色26
• 2.2.4.2 观察检测26
• 2.2.5 流式细胞仪检测细胞周期26-27
• 2.2.6 实时荧光定量PCR检测基因转录水平的变化27-29
• 2.2.6.1 mRNA抽提27
• 2.2.6.2 mRNA反转录成cDNA27-29
• 2.2.6.3 REALTIME-PCR29
• 2.2.7 Western blot检测蛋白表达水平的变化29-35
• 2.2.7.1 蛋白提取29-30
• 2.2.7.2 制作BCA标准曲线30-31
• 2.2.7.3 SDS-PAGE制备31-33
• 2.2.7.4 转膜及封闭33
• 2.2.7.5 孵抗体33-34
• 2.2.7.6 显影34-35
• 第三章 结果与分析35-45
• 3.1 MTT法检测细胞活性35-37
• 3.2 AO/PI染色观察A549、Eca-109细胞形态37-39
• 3.3 流式细胞仪检测细胞凋亡（PE-Annexin V—7-ADD）39-40
• 3.4 流式细胞仪检测细胞周期（PI-stained）40-41
• 3.5 实时荧光定量PCR检测基因转录水平的变化41-43
• 3.6 Western blot检测蛋白表达水平的变化43-44
• 3.7 Western blot检测信号通路蛋白磷酸化水平的变化44-45
• 第四章 讨论45-49
• 第五章 结论与展望49-51
• 参考文献51-56
• 致谢56-59
• 在学期间的科研情况59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 季宇彬;辛国松;曲中原;邹翔;于淼;;石蒜属植物生物碱类化学成分和药理作用研究进展[J];中草药;2016年01期

2 黄丹仪;吴转斌;黄勤;张梦杰;杨桦;石嘉豪;盛哲津;费俭;;斑蝥酸钠与喜树碱联用抗肿瘤效果的实验研究[J];中国细胞生物学学报;2014年11期

3 张娟;李东霞;;小檗碱抗肿瘤作用机制的研究进展[J];医学综述;2014年04期

4 郭林丰;童姗姗;余江南;徐希明;;苦参碱抗肿瘤作用机制研究进展[J];中国中药杂志;2013年20期

5 闫冠韫;王立波;程伟;;中药抗肿瘤生物碱类药物的研究进展[J];中医药学报;2013年02期

6 习利平;宋新波;张丽娟;;长春碱类抗肿瘤药的研究进展[J];药物评价研究;2011年01期

，

本文编号：658203