APEX1,Jagged1在肝细胞癌中的表达及相关性研究

发布时间：2017-08-13 09:10

  本文关键词：APEX1,Jagged1在肝细胞癌中的表达及相关性研究

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【摘要】：目的:从m RNA及蛋白水平检测脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APEX1)、jagged1在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况,并探讨其与HCC临床病理特征的关系及两者之间的相关性。检测HCC中Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表达,分析jagged1与四个受体之间的相关性。构建LV-APEX1-RNAi慢病毒表达载体,观察靶向干扰APEX1后对SMMC-7721细胞生物学行为的影响,检测其介导的RNAi干扰对SMMC-7721细胞APEX1 m RNA和蛋白表达的影响,并检测jagged1表达的变化,探讨APEX1在HCC侵袭转移中的作用。方法:1.采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术,从m RNA水平上检测46例HCC及相应癌旁和远癌肝组织,13例正常肝组织中APEX1、jagged1的表达情况,并分析APEX1与jagged1表达的相关性;检测36例HCC中Notch1、Notch2、Notch3、Notch4 m RNA的表达,分析其与jagged1的相关性。2.采用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法在蛋白质水平上分别检测了25例HCC及癌旁正常肝组织中APEX1蛋白表达及18例HCC及癌旁正常肝组织中jagged1蛋白。3.采用免疫组织化学染色(IHC)方法结合组织芯片技术,检测119例HCC、癌旁肝组织中APEX1、jagged1蛋白表达情况;并分析上述蛋白表达的相关性、与HCC临床病理参数的关系。4.培养肝癌细胞株SMMC-7721,使用慢病毒载体介导的si RNA技术,用构建的LV-APEX1-RNAi(实验组)表达载体感染细胞,并设LV-APEX1-NC(空载体)组,Real-time PCR及Western Blot检测感染后肝癌细胞中APEX1的m RNA及蛋白表达情况。5.选择APEX1表达下调的SMMC-7721细胞(SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi)及它的对照组细胞,通过噻唑蓝(MTT)比色法和Transwell小室法检测细胞的增殖、侵袭及迁移能力的变化。6.Western Blot检测感染LV-APEX1-RNAi后肝癌细胞中jagged1表达水平的变化。结果:1.Real-time PCR结果显示APEX1 m RNA在HCC、癌旁、远癌及正常肝组织中的相对表达量(Relative quantity,RQ)分别为2.154±1.644、1.152±0.689、1.352±0.818、0.960±0.039。APEX1 m RNA在HCC中的表达明显高于癌旁、远癌和正常肝组织,差异有统计学意义(P?0.01)。HCC组织中APEX1 m RNA的相对表达水平和HCC组织的分化程度、有无包膜侵犯及术后有无复发有关,差异有统计学意义(P?0.05)。除外,APEX1的表达水平和年龄、性别、术前AFP水平、是否合并肝硬化、有无乙肝表面抗原、肿瘤大小、肿瘤数目无关。2.Western Blot及免疫组化结果显示APEX1蛋白及jagged1蛋白在HCC中的表达均高于癌旁肝组织,差异有统计学意义。3.结合免疫组化中jagged1蛋白的表达情况和HCC患者临床病理参数进行统计分析,结果显示Jagged1蛋白表达与HCC的分化程度、术前AFP、是否转移及术后是否复发关系密切,差异有统计学意义。除外,jagged1的表达与性别、年龄、肿瘤大小、有无硬化、有无脉管癌栓等均无关(P0.05)4.经过Spearman秩相关分析,发现在HCC中APEX1与jagged1的表达存在正相关性(P?0.05);在m RNA水平jagged1的表达与Notch信号通路Notch3的表达存在正相关性(r=0.501,P=0.002),与Notch1、Notch 2、Notch4的表达无相关性(r=0.055,P=0.750;r=-0.236,P=0.640;r=-0.138,P=0.421)。5.SMMC-7721细胞转染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,与空载体NC组相比,其APEX1 m RNA和蛋白表达明显降低。6.MTT实验结果显示SMMC-7721-LV-APEX1-RNAi的增殖速度较空载体NC组明显减慢(P?0.01),Transwell实验结果显示其侵袭及迁移细胞数明显减少(P?0.01)。7.SMMC-7721细胞转染慢病毒LV-APEX1-RNAi后,APEX1表达降低的同时,jagged1的表达明显降低。结论:1.APEX1促进了肝细胞癌的增殖和侵袭转移,参与肿瘤的发生发展。2.Jagged1的表达可能促进肝细胞癌的发生发展。3.APEX1可能通过参与上调jagged1/Notch信号通路而在HCC中发挥促癌作用。
【关键词】：APEX1 jagged1 肝细胞癌 SMMC-7721细胞
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 英、汉缩略名词对照表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分12-40
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 结果26-36
• 讨论36-40
• 第二部分40-52
• 前言40-41
• 材料和方法41-47
• 结果47-51
• 讨论51-52
• 结论52-53
• 参考文献53-57
• 综述57-65
• 参考文献61-65
• 致谢65

【参考文献】

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1 许良中，杨文涛;免疫组织化学反应结果的判断标准[J];中国癌症杂志;1996年04期

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本文编号：666496