食管鳞癌TP53，HER-2，MRP-1突变及蛋白表达与临床病理特征对预后的影响

发布时间：2017-08-13 16:11

  本文关键词：食管鳞癌TP53，HER-2，MRP-1突变及蛋白表达与临床病理特征对预后的影响

  更多相关文章： TP53 HER2 MRP-1 外显子测序 突变率 突变类型 免疫组化 生存分析

【摘要】：1研究背景与目的食管癌是世界上8大最常见的恶性肿瘤之一,癌症死亡率为第6。我国是食管癌多发地域,食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是其主要病理类型,占95%以上。目前,有关食管癌发生机制研究观点渐趋一致,认为癌症是基因与环境交互作用的结局,涉及多基因参与、多因素影响、多阶段的变异积累的演进过程。随着人类对肿瘤遗传学的认识不断深入和第二代、第三代高通量测序新兴技术发展,基因组学的研究进入了蓬勃发展的阶段。中国科研工作者独立开展的有关ESCC基因GWAS研究,获得了丰硕的成果。肿瘤的浸润深度,分化级别,淋巴结有无转移[10-11],远处器官有无转移等均可影响ESCC患者的生存;化疗患者出现耐药现象也是影响治疗方案选择及治疗功效的主要影响因素。探讨ESCC发生、进展、化疗耐药的相关基因研究对于早期预防,阻止进展,解除耐药具有重要意义。而癌基因和抑癌基因的激活必须通过其编码产物或影响其他编码产物的方式才能引起正常细胞的恶性转变,运用免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)手段分析与这些易感位点或致病基因控制的蛋白产物对于探讨基因改变对肿瘤的影响具有非常重要意义。本研究结合ESCC组织P53,HER-2,MRP-1三种基因外显子测序结果分析突变基因的突变类型及突变率差异,结合三种蛋白IHC结果,探讨ESCC患者三种基因的蛋白表达情况和临床病理特征对预后之间的影响,进一步分析P53,HER-2,MRP-1表达之间是否具有关联,判断三种蛋白独立或联合表达对预后的价值。以期对ESCC发生发展的基因组水平的改变有进一步的认识;获得高效,敏感的特异性蛋白检测指标,指导相关人群实施有效的预防和干预治疗及基因治疗。2材料与方法:2.1研究对象本研究分为外显子测序组食管癌高发区ESCC患者116例和癌组织蛋白表达组ESCC患者728例,所有患者全部来自河南省郑州大学第一附属医院食管癌重点开放实验室50万食管癌与贲门癌生物样品信息资料库(病例信息时间跨度为1973-2015年)。从资料库选取术后病理为食管鳞癌,病理临床信息核查补充完善,728例蛋白表达分析组具有详细IHC结果,成功随访的患者进行研究。116例外显子测序组从治疗医院收集相应患者癌组织及癌旁正常组织蜡块,并置于-20度冰箱保存。2.2实验方法对外显子测序分析组116例ESCC进行石蜡组织DNA提取,获得DNA后进行电泳及DNA浓度测量及标化,使符合外显子测序标准。进行测序。2.3统计学方法使用SPSS 21.0对数据进行统计学分析。运用x2检验进行组间差异比较,Spearman秩相关分析变量之间的相关性;Kaplan-Meier法绘制生存曲线,进行生存率的估计,log-rank法检验生存差异;Cox比例风险回归模型筛选食管鳞癌患者预后的影响因素。检验水准:α=0.05。3结果3.1 ESCC癌组织全基因外显子测序结果3.1.1整体突变情况检测116例ESCC外显子范围内的突变进行分析,共发现166945个突变事件,其中SNP突变为主,占94.96%,Insertion和Deletion仅占2.29%与2.74%。3'Flank,5'Flank,RNA突变率较高,分别为15.32%,15.36%,42.81%。3.1.2 TP53基因突变结果TP53外显子发生突变例数为80例,发生突变的频率是68.6%。共发生100个突变事件,包括83个SNP、9个Insertion和8个Deletion。错义突变发生率最高为58%,无义突变发生率次之为20%,然后是移码插入发生率为9%。TP53基因外显子发生SNP突变率明显低于全外显子组的SNP突变发生率,发生Deletion和Insertion的突变率明显高于全外显子组的SNP突变发生率。3.1.3 HER2与MRP-1基因突变结果HER2基因发生突变频率为1.72%(2/116),共两个突变事件;MRP-1基因发生突变频率为3.45%(4/116),共10个突变事件。3.2 IHC蛋白表达分子组结果3.2.1 ESCC组织中P53,HER-2,MRP-1三种蛋白表达分别与临床病理特征之间的关系(1)P53蛋白阳性表达比例44.1%(321/728)。P53蛋白表达在淋巴结未发生转移组阳性率明显低于淋巴结发生转移组;P53表达在病理分级III,IV及中阳性率明显高于I,II级组;P53蛋白在中晚期阳性表达率是早期患者的阳性率的2倍以上。(2)HER-2蛋白阳性表达比例46.0%(280/728)。随着在肿瘤分化较差,淋巴结发生转移,远处器官转移,病理分级加重,临床分期加重,HER-2在ESCC组织中的阳性表达率随之升高。(3)MRP-1蛋白阳性表达比例51.5%(375/728)。MRP-1蛋白随着病理分级的加重阳性率依次上升,I,II,III,IV期的阳性率依次为34.4%,50.8%,52.4%,72.7%;MRP-1蛋白在早期中晚期患者的阳性率也依次升高34.4%,51.6%,72.7%;MRP-1表达的阳性率53.5%明显高于未发生器官转移组的阳性率48.9%。(4)P53的表达与HER-2,MRP-1三者的表达均不具有相关性。3.2.2 ESCC组织中P53,HER-2,MRP-1三种蛋白表达差异对患者预后的影响(1)P53蛋白表达阳性组生存较阴性组差c2=6.522,p=0.01,中位生存期分别为2.638,4.016,相差1.5倍;发生远处转移组(M0)P53蛋白表达较未发生转移组预后差,中位生存期分别为2.732,4.197。(2)HER-2蛋白阳性组较阴性组预后差c2=8.199,p=0.004,中位生存期分别为2.732,4.170。发生淋巴结转移组(N1)的HER-2表达阴性组较阳性组预后好;发生远处器官转移组(M1)与未发生远处转移组(M0)HER-2表达阴性组均较阳性组预后好。(3)生存分析结果显示MRP-1与肿瘤的生存之间不存在相关性。(4)P53,HER-2的表达进行组合组生存分析发现,P53,HER-2双阳性表达组与单阳性组、双阴性组相比预后最差。4.结论4.1外显子测序组结论(1)116食管鳞癌患者均发生了不同程度的基因外显子突变,共发生166945个突变事件,其中SNP突变为主,占94.96%。(2)TP53外显子发生突变例数为80例,发生突变的频率是68.6%。共发生100个突变事件,错义突变发生率最高为58%。(3)TP53外显子发生SNP突变率明显低于WES,发生Deletion和Insertion的突变率明显高于全基因组外显子测序。(4)本研究显示河南省林州等地高发区食管鳞癌HER2和MRP-1发生外显子突变率分别为1.72%和3.45%。4.2蛋白表达分析组结论(1)P53蛋白过表达是影响食管鳞癌患者生存的独立影响因素之一,阳性组生存较阴性组差,P53与食管鳞癌患者预后不良相关,且无论是否发生远处器官的转移。(2)HER-2蛋白表达是影响食管鳞癌患者生存的独立影响因素之一,HER-2过表达与食管鳞癌患者预后不良相关,且无论是否发生淋巴结转移或远处器官的转移。(3)MRP-1与肿瘤的生存之间不存在相关性。(4)P53与HER-2两种蛋白同时过度表达组的预后较单纯表达一种蛋白组差。
【关键词】：TP53 HER2 MRP-1 外显子测序 突变率 突变类型 免疫组化 生存分析
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 摘要4-9
• Abstract9-16
• 符号说明16-17
• 第一部分 食管鳞癌组织TP53,HER-2 和MRP-1 基因外显子突变结果分析17-32
• 1 研究背景与目的17-19
• 2 材料与方法19-22
• 3 结果22-24
• 4 讨论24-26
• 5 结论26-27
• 参考文献27-29
• 附表29-32
• 第二部分 食管鳞癌组织TP53,HER-2 和MRP-1 蛋白表达与临床病理特征对预后的影响32-63
• 1 研究背景与目的32-35
• 2 材料与方法35-37
• 3 结果37-42
• 4 讨论42-47
• 5 结论47-48
• 参考文献48-53
• 附表53-63
• 综述 中国人群食管鳞癌全基因组外显子测序研究进展63-76
• 参考文献72-76
• 个人简历76-78
• 致谢78-79

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