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葡萄糖调节蛋白78对人舌癌细胞侵袭和转移的影响及其机制的研究

发布时间:2017-08-13 16:11

  本文关键词:葡萄糖调节蛋白78对人舌癌细胞侵袭和转移的影响及其机制的研究


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【摘要】:目的探讨葡萄糖调节蛋白78(glμcose regμlated protein 78,Grp78)对人舌癌细胞系Tca-8113侵袭和转移的影响及其分子机制。方法应用pc DNA3.1(+)-Grp78重组质粒转染舌癌细胞系Tca-8113,经G418筛选得到稳定表达Grp78的克隆(78C6),免疫印迹法检测Grp78表达的效率,再应用si RNA-Grp78和si RNA-FAK转染78C6敲除Grp78和FAK表达,应用划痕和Transwell实验方法分析其迁移和侵袭能力,免疫荧光和细胞粘附实验检测细胞骨架排列和细胞的粘附能力,GST-pulldown技术对Rac1和Rho A活性进行分析,Western blot检测p-FAK、FAK、Rac1、Rho A的蛋白表达。结果1.特异性上调Grp78表达明显促进舌癌细胞的侵袭和转移,并且此作用可以被si RNA-Grp78转染抑制(P0.05)。2.高表达Grp78可使舌癌细胞的粘附能力增加,下调Grp78后细胞的粘附能力降低(P0.05)。3.细胞骨架染色结果表明,特异性上调Grp78后细胞骨架微丝主要分布于细胞边缘,而这种作用可以被si RNA-Grp78转染抑制,导致细胞皮质部位出现明显的应力纤维。4.特异性上调Grp78后Rac1的活性水平增高Rho A活性降低,而si RNA-Grp78转染的细胞中Rac1活性降低,Rho A活性升高(P0.05),但Rho A和Rac1的蛋白表达水平不受Grp78的影响(P0.05)。5.特异性上调Grp78后p-FAK表达增高,下调Grp78后p-FAK表达降低,(P0.05),但FAK总蛋白表达水平不受Grp78的影响。6.在78C6细胞中下调FAK后,Rho A活性升高而Rac1的活性降低(P0.05),但Rho A和Rac1的蛋白表达水平不受FAK的影响(P0.05)。7.在78C6细胞中下调FAK表达后,与对照组相比,细胞的迁移侵袭及粘附能力明显降低(P0.05),细胞骨架染色显示下调FAK后细胞中应力纤维明显增多。结论1.Grp78的表达水平可以影响舌癌细胞的迁移、侵袭、粘附及细胞骨架的排列。2.Grp78可能通过调节FAK的磷酸化影响Rho A和Rac1的活性从而促进舌癌细胞发生侵袭和转移。
【关键词】:葡糖糖调节蛋白78 黏着斑激酶 舌癌 侵袭转移
【学位授予单位】:辽宁医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R739.86
【目录】:
  • 中文论著摘要4-6
  • 英文论著摘要6-8
  • 英文缩略语8-9
  • 前言9-10
  • 实验材料与方法10-14
  • 实验结果14-16
  • 讨论16-20
  • 结论20-21
  • 本研究创新性的自我平评价21-22
  • 参考文献22-25
  • 附图附表25-34
  • 综述34-45
  • 参考文献41-45
  • 在学期间科研成绩45-46
  • 致谢46-47
  • 个人简历47-48

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王莉;张旭;刘丽秋;孙玉鸿;朱艳丽;赵玉德;江清林;;RhoA和C-myc在胃癌发生发展中的表达及意义[J];实用医学杂志;2014年19期



本文编号:668162

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