MEG3-miR-770-5p-ARPC2通路在上皮性卵巢癌发病机制中的初步研究

发布时间：2017-08-14 06:26

  本文关键词：MEG3-miR-770-5p-ARPC2通路在上皮性卵巢癌发病机制中的初步研究

  更多相关文章： 上皮性卵巢癌 MEG3 宿主基因 迁移 增殖

【摘要】：上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer, EOC)发病隐匿,通常发现时大部分已是晚期且有转移。众所周知,异常的细胞增殖和迁移与肿瘤的转移密切相关,促进了这一疾病的发生与进展。长链非编码RNA MEG3(母系表达的基因3)已经被报道能通过影响细胞迁移和增殖参与多种肿瘤的发生发展,其机制主要是通过P53途径或DNA甲基化,但目前并而没有证据表明可以以宿主基因的功能在肿瘤发病机理发挥作用。最近的一项研究报道了MEG3在上皮性卵巢癌中的功能,但没有研究关注它的功能在其下游基因的受体。我们研究组通过Quantitative RT-PCR(qRT-PCR)检测了上皮性卵巢癌与卵巢良性肿瘤中MEG3的miRNA表达,发现EOC实验组较对照组低表达,存在显著差异。本研究以MEG3为研究出发点,检索了pubmed、ensembl等生物信息网站,发现MEG3基因序列最后面的内含子编码进化上高度保守miR-770-5p,为此探讨其MEG3作为宿主基因通过miR-770-5p参与上皮性卵巢癌发病机制的可能性。我们通过生物信息学软件预测miR-770-5p的靶基因,发现ARPC2是其潜在靶基因。应用Quantitative RT-PCR(qRT-PCR)、Western Blot技术检测miR-770-5p及其潜在靶基因ARPC2在上皮性卵巢癌中的表达,发现miR-770-5p在上皮性卵巢癌中呈现显著性低表达,而其靶基因ARPC2呈现显著高表达。同时,我们选用卵巢癌相关细胞株OMC685与HEY细胞作为体外实验研究细胞,降低体外细胞中MEG3的表达,发现细胞的迁移和增殖能力增强。应用双荧光素酶报告基因试验体外验证miR-770-5p和其靶基因ARPC2的关系,发现miR-770-5p确实是和ARPC2 3'端未翻译区(3' untranslated region,3'UTR)结合。将miR-770-5p inhibitor (miR-770-5p抑制子)转染到细胞,使miR-770-5p呈低表达水平,然后检测ARPC2的表达,发现其呈现高表达水平,且细胞的迁移和增殖能力也同样增强。通过RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术抑制体外细胞株中ARPC2的表达,发现细胞的迁移和增殖能力都得到了部分抑制。通过本研究我们可以得出以下信息：由于宿主基因MEG3的低表达影响了miR-770-5p的表达水平,从而使其靶基因ARPC2呈现高表达,这条信号通路的改变抑制了细胞的迁移和增殖能力,从而在上皮性卵巢癌的发生中可能发挥一定的作用。综上所述,本研究首次探讨了MEG3-miR-770-5p-ARPC2通路在上皮性卵巢癌发病机制中的可能作用,为上皮性卵巢癌的发生机制研究提供了新的线索和理论依据。
【关键词】：上皮性卵巢癌 MEG3 宿主基因 迁移 增殖
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一章 前言10-16
• 1.1 上皮性卵巢癌的背景10-11
• 1.2 非编码RNA(ncRNA)的研究背景11-12
• 1.3 长链非编码RNA MEG3的研究背景12
• 1.4 研究的目的、意义及内容12-14
• 参考文献14-16
• 第二章 材料与方法16-37
• 2.1 实验材料16-21
• 2.1.1 组织标本16
• 2.1.2 细胞株16
• 2.1.3 主要试剂16-18
• 2.1.4 主要溶液18-20
• 2.1.5 实验所用主要仪器20-21
• 2.2 实验方法21-37
• 2.2.1 RNA提取21-22
• 2.2.2 RNA定量和纯度分析22-23
• 2.2.3 逆转录23-24
• 2.2.4 实时定量PCR24-26
• 2.2.5 蛋白提取26-27
• 2.2.6 蛋白浓度测定与上样蛋白的制备27-28
• 2.2.7 Western Blot28-31
• 2.2.8 细胞培养31-32
• 2.2.9 质粒提取32-33
• 2.2.10 双荧光素酶报告基因33
• 2.2.11 细胞迁移实验---Transwell33-34
• 2.2.12 细胞增殖实验---CCK-834
• 2.2.13 ARPC2 siRNA扭转实验34-35
• 2.2.14 细胞周期实验35
• 2.2.15 细胞凋亡实验35
• 2.2.16 数据处理与统计分析35-37
• 第三章 实验结果37-49
• 3.1 临床信息分析37
• 3.2 lncRNA-MEG3及相关基因的表达37-43
• 3.2.1 MEG3的表达37-38
• 3.2.2 MEG3 mRNA表达与上皮性卵巢癌患者临床病理特征相关性38-39
• 3.2.3 内含子miR-770-5p的mRNA表达39-40
• 3.2.4 MEG3和miR-770-5p的相关性分析结果40
• 3.2.5 miR-770-5p的靶基因预测及其表达40-42
• 3.2.6 靶基因ARPC2蛋白水平表达42
• 3.2.7 miR-770-5p和ARPC2的相关性分析结果42-43
• 3.3 转染MEG3 siRNA后细胞生物学功能的检测43-45
• 3.4 转染miR-770-5p inhibitor后细胞生物学功能的检测45-46
• 3.5 体外验证miR-770-5p与靶基因的调控关系46-47
• 3.5.1 双荧光素酶报告基因验证调控关系46-47
• 3.5.2 体外细胞转染MEG3 siRNA、miR-770-5p inhibitor后ARPC2的表达47
• 3.6 ARPC2 siRNA扭转实验47-49
• 第四章 讨论49-53
• 参考文献53-55
• 长链非编码RNA在卵巢癌中的研究进展55-65
• 参考文献61-65
• 缩略语65-66
• 攻读学位期间发表文章情况66-67
• 致谢67-68

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本文编号：671220