OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长的研究

发布时间：2017-08-16 16:15

  本文关键词：OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长的研究

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【摘要】：目的:在前期实验研究中,本课题组的研究人员利用体内噬菌体展示技术首次筛选得到了卵巢癌特异性结合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP),并对其性质进行了验证。本实验进一步将OSTP与顺铂(cis-Dichlorodiamineplatinum,DDP)进行耦联,研究该耦联物(OSTP-DDP)对卵巢癌A2780细胞的靶向抑制作用。为探索和研究新的肿瘤分子靶向药物奠定基础。方法:OSTP-DDP化学合成;体外培养卵巢癌A2780细胞;CCK-8法(Cell Counting Kit-8)检测OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用,并计算其IC50值;平板克隆形成实验检测OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡的影响;高效液相色谱分析(HPLC)检测OSTP-DDP进入卵巢癌A2780细胞的量;建立卵巢癌A2780细胞的裸鼠移植瘤模型,随机分成4组(空白组、DMSO组、DDP组和OSTP-DDP组),验证OSTP-DDP的体内靶向抑瘤作用;检测裸鼠血常规和生化常规,观察OSTP-DDP的全身毒副作用。结果:1、从质谱分析(MS)和高效液相色谱(HPLC)分析中得出,OSTP-DDP合成成功。2、体外CCK-8法表明分别用不同浓度的OSTP-DDP与DDP(10、20、40、80、160、320μmol?L-1)处理A2780细胞24h、48h、72h后均可抑制A2780细胞的生长,并且该抑制作用随着时间和浓度逐渐增强。OSTP-DDP的作用强于DDP(P0.05),提示OSTP-DDP具有对卵巢癌a2780细胞生长的靶向抑制作用。3、通过平板克隆形成实验结果显示ostp-ddp和ddp均可抑制肿瘤生长,但两者的差异无明显的统计学意义(p0.05)。4、通过流式细胞术检测表明:经ostp-ddp和ddp作用后,a2780细胞的生长周期均被阻滞于g1期,作用72h后,ostp-ddp组细胞周期被阻滞在g1期为77.41±1.36,ddp组细胞周期被阻滞在g1期为71.11±0.86,说明ostp-ddp对卵巢癌a2780细胞的周期阻滞作用强于ddp,差异具有统计学意义(p0.05)。作用24h、48h、72h后,ostp-ddp组的凋亡率分别为:7.51%、44.46%、52.73%,ddp组的凋亡率分别为:4.44%、13.66%、15.67%。ostp-ddp对卵巢癌a2780细胞凋亡的作用强于ddp组(p0.01),差异具有统计学意义,提示ostp-ddp具有较强的诱导细胞凋亡的靶向作用。5、通过高效液相色谱分析,结果显示:ostp-ddp液体样品中残留的ddp含量分别为12.7696%(20μmol?l-1)、0.8162%(40μmol?l-1)、0.5406%(80μmol?l-1)、0.0800%(160μmol?l-1)、0.0700%(320μmol?l-1)。ddp液体样品中残留的ddp含量分别为17.1123%(20μmol?l-1)、1.2643%(40μmol?l-1)1.1500%(80μmol?l-1)、1.1191%(160μmol?l-1)、0.1091%(320μmol?l-1)。显示ostp-ddp组中ddp进入细胞的量要多于ddp组进入细胞的量。6、卵巢癌裸鼠移植瘤模型构建成功,体内实验表明3mg·kg-1ostp-ddp与ddp均对卵巢癌a2780细胞移植瘤具有一定的抑制作用,且ostp-ddp的抑制作用明显强于ddp的作用(p0.05),差异具有统计学意义。裸鼠血常规和生化常规显示OSTP-DDP能减少DDP所带来的骨髓抑制、肾毒性和肝脏毒性等全身毒副作用,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论:通过体内外实验证实OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞具有靶向抑制作用,且其能够减少DDP所带来的全身毒副作用。
【关键词】：卵巢癌A2780细胞 OSTP-DDP 靶向治疗 DDP 细胞生长抑制
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 主要中英文缩略词表12-13
• 第1章 绪论13-17
• 第2章 技术路线17-19
• 第3章 材料和方法19-29
• 3.1 实验材料和主要试剂19-21
• 3.2 实验方法21-29
• 第4章 实验结果29-39
• 4.1 耦联物的分析结果提示已成功合成OSTP-DDP29-30
• 4.2 OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞生长的抑制作用30
• 4.3 平板克隆形成实验结果30-31
• 4.4 应用流式细胞术分别检测卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡31-34
• 4.5 通过高效液相色谱分析直观检测进入细胞内DDP的含量34
• 4.6 OSTP-DDP对体内卵巢癌A2780细胞具有靶向抑制作用34-39
• 第5章 讨论39-49
• 第6章 结论49-51
• 参考文献51-59
• 文献综述 卵巢癌的免疫靶向治疗59-68
• 参考文献65-68
• 本研究课题资助项目68-69
• 攻读学位期间发表的论文69-70
• 致谢70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Siwei Zhang;Ping Zhao;Guanglin Li;Lingyou Wu;Jie He;;The incidences and mortalities of major cancers in China, 2009[J];Chinese Journal of Cancer;2013年03期

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本文编号：684242