HBV阳性肝癌血清miRNA标志物的筛选及HBV编码miRNA的预测与鉴定

发布时间：2017-08-16 16:19

  本文关键词：HBV阳性肝癌血清miRNA标志物的筛选及HBV编码miRNA的预测与鉴定

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【摘要】：肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，由于临床缺乏有效的预防、检测及治疗手段，，大多数患者发现时已属癌症中晚期，且预后较差，因此寻找可靠的生物标志物用于肝癌诊断和预后判断具有重要意义。MicroRNA（miRNA）是一类内源性的，长度约为22nt的非编码功能性RNA，由于RNAase的保护作用在血清或血浆中表现出高度的稳定性。研究表明miRNA扮演着癌基因或抑癌基因的角色，并能同时调节多个基因，通过结合靶mRNA的方式参与调控肿瘤的发生发展。因此认为miRNA在肝癌和正常血清样本中呈现显著的差异表达水平，对肝癌筛查和诊断具有潜在的指示作用。 本论文从杭州西溪医院共收集未经过任何化疗处理的52例肝癌血清样本和25例正常对照样本，对乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）阳性肝癌样本和正常样本各5例分别混合得到两个混合样，构建miRNA文库进行miRNA表达谱测序。通过对高通量测序所得的数据进行分析处理，共获得172条在肝癌和正常血清样本中差异表达的miRNAs，结合文献报导筛选了三条差异表达的miRNAs进行大样本量验证。相对于正常对照样本，miR-182-5p、363-3p和378a-3p在肝癌样本中显著高表达，并达到极显著水平（P0.01），且这三条目标miRNAs也能较好地区分HBV阳性肝癌和正常样本，在临床诊断中具有广泛的科研价值和临床应用前景。 为探究乙型肝炎病毒是否能够编码miRNA，与宿主mRNA靶向结合来参与病毒感染的调控机制，本论文通过Vir-Mir数据库预测乙肝病毒编码的pre-miRNAs，并结合miRNA表达谱测序和实时荧光定量PCR方法验证成熟体miRNA。结果显示HBV阳性肝癌血清样本中存在六条候选pre-miRNAs，并成功验证其中一条成熟体命名为hbv-miR-15467，为病毒性肝病的治疗策略提供了新的思路。
【关键词】：miRNA 肝癌 生物标记物 乙肝病毒 治疗
【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 目录11-13
• 略语表13-14
• 一 文献综述14-22
• 1 miRNA 概论14-15
• 2 肝脏中特异性表达的 miR-12215-16
• 3 miRNA 在肝细胞癌中的临床应用16-18
• 3.1 与定性诊断相关的 miRNA16-17
• 3.2 与预后判断及耐药性相关的 miRNA17-18
• 4 miRNA 在肝细胞癌发生发展中的调控机制18-20
• 4.1 参与调控细胞周期进程的 miRNA 功能研究18-19
• 4.2 与 HCC 增殖和侵袭相关的 miRNA 功能研究19-20
• 5 乙肝病毒编码 miRNA 的研究进展20
• 6 展望20-22
• 二 实验方案设计22-25
• 1 研究目的和意义22-23
• 2 研究主要内容23-24
• 3 实验流程24-25
• 三 材料和方法25-41
• 1 材料25-27
• 1.1 样本收集和信息整理25-26
• 1.2 实验仪器26
• 1.3 实验试剂26-27
• 2 方法27-41
• 2.1 血清样本中总 RNA 提取27-28
• 2.2 总 RNA 的定量和质量检测28
• 2.3 miRNA 表达谱测序28-29
• 2.4 miRNA 测序结果分析29-30
• 2.5 miRNA 的定量分析30-33
• 2.6 miRNA 的靶基因预测33-34
• 2.7 病毒编码 miRNA 的预测34
• 2.8 pre-miRNA 的初步验证34-39
• 2.9 成熟体 miRNA 的定位39-40
• 2.10 病毒 miRNA 靶基因预测40-41
• 四 结果和分析41-59
• 1 样本总 RNA 的质量分析41
• 2 高通量测序结果及数据分析41-45
• 2.1 测序的原始数据质量基本统计42
• 2.2 Clean 序列的长度分布统计42-43
• 2.3 miRNA 表达丰度分析43-44
• 2.4 差异表达的 miRNA 筛选44-45
• 3 HBV 阳性肝癌血清标志物的筛选45-53
• 3.1 引物特异性的验证与分析45-46
• 3.2 miRNA 在肝癌和正常样本中的表达差异性分析46-48
• 3.3 建立 miRNA 预测肝癌可能性的回归方程48
• 3.4 目标 miRNAs 与病理指标的相关性分析48-49
• 3.5 验证 miRNA 在 HBV 阳性肝癌和正常样本中的表达差异49-50
• 3.6 目标 miRNAs 的靶基因预测50-53
• 4 HBV 编码 miRNA 的预测与验证53-57
• 4.1 HBV 编码的 pre-miRNA 的预测53-54
• 4.2 pre-miRNA 的初步验证54-55
• 4.3 成熟 miRNA 的定位55-56
• 4.4 hbv-miR-15467 的靶基因预测56-57
• 5 讨论57-59
• 五 总结与展望59-61
• 参考文献61-67
• 致谢67-68
• 研究生学习期间主要成果68-69
• 附录 重要试剂的配制69-70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 贾万忠;李志;伦照荣;;病毒微小RNA的发现及其功能[J];科学通报;2007年23期

本文编号：684266