贵州及周边地区斑蝥体内结合斑蝥素抗肝癌活性及对肝癌细胞生物学行为影响的研究
本文关键词：贵州及周边地区斑蝥体内结合斑蝥素抗肝癌活性及对肝癌细胞生物学行为影响的研究
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【摘要】：目的:初步分析贵州及周边不同地理种群斑蝥体内结合斑蝥素的含量,筛选出抗肝癌活性显著的地理种群,并进行对肝癌细胞生物学行为影响的研究,为后续优良地理种群斑蝥体内结合斑蝥素的开发利用提供科研基础。方法:1、水提法提取的斑蝥体内结合斑蝥素,运用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析结合斑蝥素含量;2、采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)检测结合斑蝥素对肝癌Hep G2细胞的体外抗肿瘤活性,筛选出抗肝癌活性较高3-4种优良地理种群;3、应用倒置相差显微镜观察结合斑蝥素对人肝癌Hep G2细胞形态的影响;4、Annexin V-FITC/PI双染法检测结合斑蝥素对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响;5、采用PI标记结合流式细胞术检测细胞周期的变化;6、透射电子显微镜观察结合斑蝥素作用人肝癌Hep G2细胞后超微结构的变化;7、Western blotting法检测结合斑蝥素对Hep G2细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果:1、贵州省罗甸县城区南方大斑蝥结合斑蝥素(BCMP)与黄黑小斑蝥结合斑蝥素(BCML)含量高于其它地理种群同种斑蝥,分别为375 mg·L㧟1和290 mg·L㧟1,茂N<镇境内的BCMP和BCML含量其次,分别为262mg·L㧟1和199 mg·L㧟1;2、不同地理种群的斑蝥体内结合斑蝥素对人肝癌Hep G2细胞的增殖均有抑制作用,其中茂N<镇境内的BCMP和BCML对肝癌Hep G2细胞的抑制活性明显优于其它地理种群同种斑蝥,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.78 mg·L㧟1和0.65mg·L㧟1,罗甸县城区境内的BCMP和BCML对Hep G2细胞的抑制活性其次,其半数抑制浓度分别为0.88mg·L㧟1和0.86mg·L㧟1;3、倒置相差显微镜观察结果,罗甸城区和茂N<镇两地理种群斑蝥结合斑蝥素均可造成癌细胞数目的逐渐减少,细胞形态不规则,并出现固缩、体积变小现象;4、流式细胞术结果显示,与对照组比较,茂N<镇BCMP和BCML对Hep G2细胞的凋亡率从24h的9.77±1.33%和10.27±1.44%分别增加到48h的22.16±1.35%和22.33±1.11%(P0.05);罗甸城区BCMP和BCML对细胞的凋亡率从24h的7.60±1.05%和8.17±0.50%分别增加到48h的18.70±2.26和18.87±2.50(P0.05);5、细胞周期结果示,与对照组比较,茂N<镇BCMP和BCML可使S期细胞比率下降,G2/M期细胞比率明显增加,出现G2/M期阻滞;罗甸城区BCMP和BCML可使S期细胞比率下降,G0/G1期细胞比率明显增加,G2/M期细胞比率亦有增加,主要出现G0/G1期阻滞。6、透射电镜观察示,罗甸城区和茂N<镇两地理种群斑蝥结合斑蝥素可致Hep G2细胞内质网和线粒体的肿胀,随着作用时间的延长,超微结构变化更明显。7、Western blotting结果示,与对照组相比,茂N<镇两种斑蝥结合斑蝥素组均可造成Bax蛋白表达水平的升高,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:1、斑蝥体内结合斑蝥素的含量存在地理和种群的差异;2、茂N<镇BCMP和BCML对人肝癌细胞的抑制活性优于其它地理种群,罗甸县城区BCMP和BCML的抑制活性其次。3、斑蝥体内结合斑蝥素可对肝癌Hep G2细胞的增殖和凋亡等生物学行为产生影响,主要表现为抑制其增殖和诱导其凋亡,其原因可能与癌细胞超微结构的改变和癌细胞周期阻滞以及Bax蛋白表达的上调,Bcl-2蛋白表达的下调和Bcl-2/Bax比值失衡有关。
【关键词】：斑蝥 地理种群 结合斑蝥素 肝癌HepG2细胞 生物学行为
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：
- 中英缩略词对照表4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-10
- 前言10-12
- 材料与方法12-21
- 结果21-48
- 讨论48-51
- 结论51-52
- 参考文献52-56
- 综述:斑蝥素及其衍生物的抗肿瘤机制研究进展56-65
- 参考文献62-65
- 致谢65-66
- 作者简介66
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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，本文编号：684583
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