肿瘤相关成纤维细胞通过H3K18ac促进肺癌干性

发布时间：2017-08-17 01:08

  本文关键词：肿瘤相关成纤维细胞通过H3K18ac促进肺癌干性

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【摘要】：研究背景：肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是全世界死亡率最高的肿瘤之一。随着肿瘤研究不断深入,研究人员发现肿瘤微环境(Cancer Microenvironment, CME)在肿瘤的发生发展中发挥着十分重要的作用。肿瘤相关成纤维细胞(Cancer associated fibroblasts, CAFs)作为肿瘤微环境中的重要间质成分,为肿瘤的发生、发展及转移提供了有效支持,针对CAFs靶向研究可以为肿瘤治疗提供新的策略。肿瘤的发生、发展不仅取决于遗传因素,同时也受表观遗传修饰的影响。表观遗传主要通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑等来实现对基因表达的控制。乙酰化是组蛋白的一种重要修饰方式,组蛋白乙酰化失衡可引起相应染色体结构和基因转录水平的改变,并可导致肿瘤发生。目前CAFs对肺癌的作用研究主要集中在遗传水平,而CAFs对肺癌的表观遗传改变研究甚少。本研究试从组蛋白乙酰化改变情况探究肺癌相关成纤维细胞对非小细胞肺癌影响及相关机制。研究方法：1.分离并纯化肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)和癌旁成纤维细胞(NFs)将人肺腺癌组织与癌旁组织剪碎,胶原酶IV消化完全后梯度离心得到CAFs和NFs,利用表达上皮标志Epcam磁珠纯化原代分离的成纤维细胞。2.建立CAFs与肺癌细胞共培养体系体外原代培养肺CAFs,将其与肺腺癌细胞株小室共培养3天,Real-time PCR、 Western blot检测肿瘤细胞干性相关因子的变化,流式检测干性标志变化。筛选肺癌细胞株与CAF共培养后组蛋白乙酰化标志变化。3.Western blot,免疫组织化学法检测临床肺癌组织标本H3K18ac的表达。4.构建3号组蛋白18位赖氨酸残基突变成丙氨酸(H3K18A)的细胞株,检测突变株干性及致瘤性改变。实验结果：1.CAFs相较于NFs高表达a-SMA与FSP-1。2.CAFs可促使肺癌细胞株的干性增强,致瘤性增强。3.CAFs与肺癌细胞株共培养后,肺癌细胞株H3K18ac表达增强。4.H3K18ac在肺腺癌组织标本中高表达。5.相较于未突变的肺癌细胞株,H3K18A突变的肺癌细胞干细胞标志表达下降。6.转化生长因子β (transforming growth factor-β, TGF-β)处理肺腺癌细胞后可引起肺腺癌细胞H3K18ac表达增强。实验结论：CAF可能通过分泌TGF-β引起肺癌H3K18ac表达增强,从而导致干性增强,最终促进肿瘤发生、发展。提示H3K18ac可能是促进肺癌发生发展的潜在表观标志。
【关键词】：肿瘤相关性成纤维 非小细胞肺癌 肿瘤干性 组蛋白3赖氨酸残基18乙酰化
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 缩略词表10-12
• 1. 前言12-14
• 2. 实验材料和方法14-22
• 2.1 实验材料14-18
• 2.2 实验方法18-22
• 3. 实验结果22-33
• 3.1. CAFs和NFs的鉴定22-23
• 3.2 CAFs促进肺癌细胞株的干性增强,致瘤性增强23-26
• 3.3 肺癌细胞株与CAFs共培养后,H3K18ac表达增强26-27
• 3.4. H3K18ac在肺腺癌组织标本中高表达27-30
• 3.5 H3K18A突变的肺癌细胞株30-31
• 3.6. TGF-β能使肺癌细胞株H3K18ac的表达增加31-33
• 4. 讨论33-35
• 参考文献35-36
• 综述36-48
• 参考文献42-48
• 作者简介48

【参考文献】

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1 Run-Long Lin;Lu-Jun Zhao;;Mechanistic basis and clinical relevance of the role of transforming growth factor-β in cancer[J];Cancer Biology & Medicine;2015年04期

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本文编号：686385